PCR vs reālā laika PCR
PĶR jeb polimerāzes ķēdes reakcija ir revolucionārs atklājums mūsdienu molekulārajā bioloģijā, kuru pirmoreiz izstrādāja ķīmiķis Kary Mullis 1983. gadā. Tas ļauj analizēšanai pastiprināt vienu sarežģītas DNS sekvenci. PĶR pamatideja ir tāda, ka divi praimeri, kas ir komplementāri pretējiem DNS secības pretējiem pavedieniem, ir orientēti viens pret otru; grunts ražo komplementārus pavedienus, no kuriem katrs satur otru grunti. Tādējādi rezultāts ir liels daudzums secības, kas atbilst DNS, kas atrodas starp abiem primeriem. DNS polimerāzes enzīmu izmanto, lai pagarinātu gruntējumus PCR. DNS polimerāze ir termostabils ferments, un tai piemīt spēja izdzīvot augstā temperatūrā (94 līdz 95 ° C), ko izmanto matricas DNS denaturēšanai.
PCR ietver trīs posmus, proti, atkārtotas denaturēšanas kārtas, gruntiņu atlaidināšanu un DNS sintēzi. Lai veiktu šo reakciju, tiek izmantota termociklista mašīna, lai to varētu ieprogrammēt ātri un precīzi mainīt temperatūru. PĶR ir kriminālizmeklēšana, DNS pirkstu nospiedumi, patogēnu noteikšana un agrīnu cilvēku sugu DNS analīze.
Kas ir parastā PCR?
Parastajai PĶR ir trīs galvenie posmi, proti; DNS amplifikācijas stadija, PCR atdalīšana un produktu noteikšana. DNS segmentu atdalīšanu parasti veic ar agarozes gēla elektroforēzi. Pēc tam produktus krāso ar etheiduimbromīdu. Visbeidzot, noteikšana tiek panākta, vizualizējot joslas uz gēliem UV gaismā. Tāpēc parasto PCR gala rezultāti nav izteikti skaitļos. Parasti parastā PCR spēj noteikt tikai vienu parametru.
Kas ir reālā laika PCR?
Reālā laika PĶR var noteikt produktu amplifikāciju, jo produkti tiek sintezēti. Attīstoties tehnoloģijai, PCR ir kļuvis par ļoti populāru paņēmienu, īpaši baktēriju noteikšanai un identificēšanai pārtikas produktos. Reālā laika PCR izmanto fluorescējošu krāsu sistēmu un termociklu, kas aprīkots ar fluorescējošas noteikšanas iespēju.
Kāda ir atšķirība starp parasto PCR un reālā laika PCR?
• Parastā PCR ir laikietilpīgāka, jo tā izmanto gēla elektroforēzi, lai analizētu pastiprinātos PCR produktus. Turpretī reālā laika PĶR ir mazāk laikietilpīga, jo tā var noteikt amplifikācijas reakcijas sākuma fāzēs.
• Reālā laika PĶR apkopo datus PCR eksponenciālās izaugsmes fāzē, savukārt tradicionālais PĶR - datus reakcijas beigu punktā.
• Parastās PĶR beigu punktu rezultāti var nebūt ļoti precīzi, bet reālā laika PĶR rezultāti ir ļoti precīzi.
• Reālā laika PĶR ir jutīgāka nekā parastā PĶR.
• Parastajai PĶR ir ļoti slikta izšķirtspēja, savukārt reālā laika PĶR var noteikt ļoti mazas izmaiņas augstas izšķirtspējas dēļ.
• Parasto PCR gala punktu noteikšanai ir mazs dinamiskais diapazons, bet reāllaika PCR noteikšanai ir plašs dinamikas diapazons.
• Atšķirībā no parastās PĶR, reālā laika PĶR tiek atrastas automatizētas noteikšanas metodes.
• Parastā PĶR ir ļoti sarežģīta un darbietilpīga vairāk nekā reālā laika PĶR.
• Atšķirībā no reālā laika PĶR, parastā PĶR nevar nošķirt mirušās un dzīvās baktērijas.
• Reālā laika PĶR produktu atklāšanai izmanto fluorescējošu krāsu sistēmu, savukārt parastā PĶR izmanto etidija bromīdu un UV gaismu, lai vizualizētu joslas agarozes gēla vidē.
