shRNS vs siRNS
RNS traucējumu (RNSi) procesa laikā mērķa gēna ekspresija tiek sagrauta ar augstu specifiskumu un selektivitāti. RNAi ir dabisks process, un tas ietver nelielu traucējošu RNS (siRNS) un īsu matadata RNS (shRNA) un divfunkcionālu shRNS. Pašlaik RNAi tiek plaši izmantots kā līdzeklis personalizētai vēža terapijai. RNSi pielietošana galvenokārt tiek veikta ar ķīmiski sintezētām divvirzienu siRNS un vektoru balstītām shRNS molekulām. Lai gan šīm divām molekulām ir līdzīgi funkcionālie rezultāti, tās atšķiras pēc to struktūras; tādējādi arī šo divu molekulu molekulārie darbības mehānismi, RNS ceļi un ārpus mērķa esošie efekti atšķiras.
shRNS
shRNS ir mazas RNS molekulas secība, kas padara stingru matadata pagriezienu, ko var izmantot, lai apklusinātu mērķa gēna ekspresiju RNAi laikā. ShRNS ekspresija tiek panākta ar vektoru, kas var būt vai nu vīruss, vai baktērija, vai ar plazmīdu piegādi. Tie tiek sintezēti šūnu kodolā un transportēti uz citoplazmu turpmākajiem procesiem. Šīm molekulām ir līdzīgi miRNS nobriešanas ceļi; tādējādi miRNS sintēze ir nodrošinājusi pamatu shRNS sintēzes izpratnei. Vai nu RNS II, vai III polimerāze var transkribēt shRNS caur RNS II vai III polimerāzes promotoriem. ShRNS izmantošanas priekšrocība ir tā, ka tiem ir salīdzinoši zems degradācijas un apgrozības ātrums. Trūkums ir tāds, ka tam nepieciešams izteiksmes vektors, kas var izraisīt zināmas drošības problēmas.
siRNS
siRNS ir divvirzienu RNS molekulas, kas sastāv no 20-25 bāzes garu pāriem. Tos izmanto gēnu nomākšanai, apklusinot jebkuru gēnu ar komplementāru nukleotīdu secību RNAi ceļā. Gēnu nokaušana, izmantojot siRNS transfekciju, pārejošas iedarbības dēļ bieži ir neveiksmīga; īpaši ātri sadalošajās šūnās, un nomākšana nav ilgāka. Lai pārvarētu šo problēmu, siRNS tiek modificēts, ieviešot īsu matadata struktūru. Šī modificētā molekula pēc tam bija pazīstama kā shRNS. shRNS jāpārvērš siRNS ar Dicer, lai turpinātu normālu darbību.
Kāda ir atšķirība starp shRNS un siRNS?
• Atšķirībā no siRNS, shRNA ir papildu matadata struktūra. shRNS ir modificēta siRNS versija.
• shRNS nepieciešams ekspresijas vektors, bet siRNS nav.
• shRNS var izmantot ilgtermiņa nokauj, savukārt siRNS var izmantot tikai īslaicīgai gēnu nomaiņai.
• Atšķirībā no siRNS gēnu nomākšanas, shRNS nomākšana ir ilgstoša, un, ja tā tiek ievietota caur piemērotu vīrusu vektoru, tā var radīt pastāvīgu gēnu klusinošu efektu.
• Dicer ir nepieciešams, lai shRNS pārvērstu atpakaļ siRNS molekulā, lai veiktu tās normālās funkcijas.
