Galvenā atšķirība - SDS lapa pret Western Blot
Western blotting ir paņēmiens, kas nosaka noteiktu olbaltumvielu no olbaltumvielu parauga. Šo paņēmienu veic ar vairākiem galvenajiem posmiem: gēla elektroforēzi, blotēšanu un hibridizāciju. Nātrija dodecilsulfāta poliakrilamīda gēla elektroforēze (SDS lapa) ir sava veida gēla elektroforēzes paņēmiens, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai pēc to lieluma (molekulmasas). Western blot ir īpaša blotēšanas membrānas loksne, ko izmanto, lai pārnestu to pašu olbaltumvielu modeli SDS Page. Galvenā atšķirība starp SDS Page un Western blot ir tāda, ka SDS Page ļauj maisījumā atdalīt olbaltumvielas, savukārt Western blot ļauj noteikt un noteikt kvantitatīvi noteiktu maisījuma proteīnu. Abi ir noderīgi olbaltumvielu analīzes pētījumos.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir SDS
3. lpp. Kas ir Western Blot
4. Blakus salīdzinājums - SDS Page vs Western Blot
5. Kopsavilkums
Kas ir SDS lapa?
SDS Page ir gēla elektroforēzes paņēmiens, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai. To parasti izmanto bioķīmijā, ģenētikā, kriminālistikā un molekulārajā bioloģijā. Kad olbaltumvielas ir ekstrahētas no parauga, tās darbina ar gēlu, kas sastāv no SDS un poliakrilamīda. SDS ir anjonu mazgāšanas līdzeklis, ko izmanto, lai linearizētu olbaltumvielas (denaturētu olbaltumvielas) un piešķirtu negatīvu lādiņu linearizētiem proteīniem proporcionāli to molekulmasai. Poliakrilamīds kļūst par cietu pamatu gēlam. Negatīvi uzlādēti denaturētie proteīni caur gēlu migrē uz aparāta pozitīvo galu. Pēc olbaltumvielu izmēriem olbaltumvielu migrācijas ātrums atšķiras un notiek atdalīšanās. Tāpēc SDS lapa ir noderīga atsevišķu olbaltumvielu atdalīšanai, pamatojoties uz to lielumiem.
Poliakrilamīda gēla sagatavošana olbaltumvielu frakcionēšanai ir izšķirošs SDS solis. Pareiza poliakrilamīda koncentrācija un izmantotā šķērssavienojuma veids spēcīgi ietekmē želejas fizikālās īpašības, kas padara faktisko dažādu olbaltumvielu atdalīšanu. Lai efektīvi nošķirtu, gela poru izmēri ir pienācīgi jāpārvalda. Tomēr SDS Page tiek uzskatīts par augstas izšķirtspējas olbaltumvielu atdalīšanas paņēmienu.
SDS Page metodei ir būtisks ierobežojums olbaltumvielu analīzē. Tā kā SDS pirms atdalīšanas denaturē olbaltumvielas, tas neļauj noteikt fermentatīvo aktivitāti, mijiedarbību ar olbaltumvielām, olbaltumvielu kofaktorus utt.
01. attēls: DDL lapa
Kas ir Western Blot?
Western blot tehnika ļauj noteikt noteiktu olbaltumvielu no olbaltumvielu maisījuma un izmērīt olbaltumvielu daudzumu un molekulmasu. Western blot ir membrāna, ko izmanto blotēšanas laikā, lai iegūtu SDS- poliakrilamīda gēla olbaltumvielu modeļu spoguļattēlu. Rietumu blotēšanai izmantoto membrānu galvenokārt veido nitroceluloze vai polivinilidēndifluorīds (PVDF). Membrānu ar pārnesto olbaltumvielu var izmantot, lai identificētu vēlamo olbaltumvielu. Tam nepieciešamas augstas kvalitātes antivielas, lai hibridizācijas ceļā noteiktu vēlamo olbaltumvielu. Antiviela saistās ar tās specifisko antigēnu un atklāj vēlamā antigēna klātbūtni, kas ir olbaltumviela.
Olbaltumvielu pārvietošanu no SDS poliakrilamīda gēla uz Western blot veic ar elektroblotingu. Tā ir efektīva un ātra metode, kas liek olbaltumvielām elektroforēt no gēla un nokļūt nitrocelulozes membrānā (Western blot).
02. attēls: Western Blot
Kāda ir atšķirība starp SDS Page un Western Blot?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
SDS lapa pret Western Blot |
|
| SDS Page ir gēla elektroforēzes paņēmiens. | Western blot ir paņēmiens, kas tiek veikts uz membrānas, lai noteiktu īpašu proteīnu no maisījuma. |
| Izmantot | |
| SDS lapa ļauj olbaltumvielas atdalīt pēc to lieluma. | Western blot ļauj pārnest olbaltumvielas uz SDS lapas gēlu, nemainot tā modeli, un ļauj hibridizēties ar specifiskām antivielām. |
| Trūkumi | |
| Olbaltumvielu denaturēšana, dārgas izmaksas un neirotoksīnu ķīmisko vielu klātbūtne ir šīs metodes trūkumi. | Šī tehnika ir laikietilpīga, un tai ir nepieciešami labi pieredzējuši personīgi un īpaši kontrolēti apstākļi. |
Kopsavilkums - SDS lapa pret Western Blot
SDS lapa un Western blot ir divas metodes, kas saistītas ar olbaltumvielu analīzi. SDS Page ļauj viegli atdalīt olbaltumvielas uz gela atbilstoši to molekulmasai. Western blot palīdz apstiprināt specifiska proteīna klātbūtni un daudzumu, izmantojot hibridizāciju ar specifiskām antivielām. Šī ir atšķirība starp SDS Page un Western blot.
