Galvenā atšķirība - Phusion vs Taq Polymerase
DNS polimerāzes ir plaši izmantoti enzīmi molekulārās bioloģijas metodēs, un tās dabiski ir arī visos organismos, kuriem tiek veikta DNS replikācija. Tie ir galvenie polimerizējošie fermenti, kas iesaistīti replikācijas laikā. DNS polimerāze spēj pievienot nukleotīdus DNS virknes brīvajam 3 'galam, tādējādi izraisot jaunas virknes pagarinājumu. Pašlaik, ņemot vērā molekulārās bioloģijas attīstību slimību diagnostikā un rūpnieciskos pielietojumos, ir svarīgi ražot polimerāzes ar dažādām labvēlīgām īpašībām. Tas palielina metodes precizitāti un padara to ātrāku tehniku. Fūzija un Taq polimerāze ir divi komerciāli ražoti termostabili polimerāzes fermenti, kurus izmanto īpašos molekulāros pielietojumos. Fūzija ir DNS polimerāze, kas izdalīta no Pyrococcus furiosus, un to galvenokārt izmanto klonēšanas eksperimentos, lai palielinātu uzticamību. Taq DNS polimerāze ir standarta DNS polimerāze, ko izmanto polimerāzes ķēdes reakcijā (PCR), un tā ir izolēta no termostabilas baktērijas; Thermus aquaticus. Galvenā atšķirība starp abiem enzīmiem ir avota mikroorganisms. Fūzija tiek izolēta no ekstremofila Pyrococcus furiosus, savukārt Taq polimerāze ir izolēta no termofila Thermus aquaticus. Taq polimerāze tiek izolēta no termofila Thermus aquaticus. Taq polimerāze tiek izolēta no termofila Thermus aquaticus.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir fūzija
3. Kas ir Taq polimerāze
4. Fūzijas un Taq polimerāzes līdzības
5. Blakus salīdzinājums - fūzija pret Taq polimerāzi tabulas veidā
6. Kopsavilkums
Kas ir Phusion?
Fūzijas DNS polimerāze ir jauna polimerāze, ko ražo, izolējot fermentu no Pyrococcus furiosus, kas ir ekstremofīlā arheja. Šie mikrobi dzīvo ārkārtīgi augstas temperatūras apstākļos, tādējādi padarot polimerāzi par ļoti karstumizturīgu polimerāzi. Fūzijas polimerāzi izmanto, lai iegūtu ārkārtēju precizitāti salīdzinājumā ar parasto termostabilo polimerāzi; Taq polimerāze. Fūzijas polimerāze spēj pastiprināt garas veidnes līdz 7,5 kb genomiskās DNS. Fūzijas polimerāzes optimālā polimerizācijas spēja ir 72 0 C. Fūziju izmanto arī produktu klonēšanā sekvencēšanai, ekspresijas analīzei un mutāciju analīzei.
Fūzijas DNS polimerāzei ir 3 ’- 5’ eksonukleāzes aktivitāte. Tas ļauj jaunizveidotās virknes korektūru pēc sintēzes. Tādējādi nukleotīdu neatbilstības ir viegli novēršamas. Tādējādi tam ir mazāks kļūdu līmenis. Fūzijas polimerāzes vispārējās priekšrocības ir;
- Galējā uzticība
- Liels ātrums un samazināts pagarināšanas laiks
- Izturīgas reakcijas un prasa minimālu optimizāciju
- Augsta raža
01. attēls: Kodolsintēze
Fūzijas polimerāzes galvenais trūkums ir tas, ka tā tiek inhibēta dezoksiuridīna trifosfāta (dUTP) klātbūtnē. Ja reakcijas maisījumā uzkrājas dUTP, tas var kavēt fūzijas polimerāzes darbību. To novērš, pirms fermenta pievienošanas apstrādājot reakcijas maisījumu ar dUTPase. Pašlaik kā fūzijas polimerāzes vietā kā līdzekli šai problēmai tiek izmantots pret dUTP izturīgs fūzijas polimerāzes variants, kas pazīstams kā Pfu Turbo.
Kas ir Taq Polymerase?
Taq DNS polimerāzes izgudrojums ir radikāli mainījis molekulārās bioloģijas jomu. Tas atrisināja galveno DNS amplifikācijas problēmu. Taq DNS polimerāze ir karstumizturīgs polimerāzes ferments, kas ekstrahēts un izolēts no termofilās baktērijas Thermus aquaticus. Šo enzīmu atklāšana izraisa PCR attīstību. Šis ferments ir ļāvis DNS amplifikācijā izmantot polimerāzes ķēdes reakciju, nevis parasto darbietilpīgo klonēšanas paņēmienu. PCR tagad tiek izmantots molekulārajā diagnostikā, lauksaimniecības un rūpniecības nozarēs, un šai tehnikai ir pievienotas daudzas jaunas variācijas.
02. attēls: Taq polimerāze
Taq DNS polimerāze darbojas optimālā temperatūras diapazonā no 72 0 C līdz 80 0 C. Taq DNS polimerāzei nepieciešams kopfaktors; magnijs tā funkcijai. Taq polimerāzei nav 3 '- 5' korektūras spējas, tāpēc Taq DNS polimerāzes kļūdu līmenis ir augsts salīdzinājumā ar vairākiem jaunākiem DNS polimerāžu veidiem, piemēram, fūzijas polimerāzes utt. Bet Taq DNS polimerāzes popularitāte joprojām ir tas pats visā zinātnes pasaulē fermenta ērtības un elastības dēļ.
Kādas ir fūzijas un Taq polimerāzes līdzības?
- Gan Phusion, gan Taq polimerāzes fermenti ir polimerizējoši fermenti, kas spēj pievienot nukleotīdus DNS virknes 3 'brīvajam galam.
- Gan Phusion, gan Taq polimerāzēm, lai sāktu polimerizāciju, nepieciešama grunts secība.
- Gan Phusion, gan Taq polimerāzes ir karstumizturīgas.
- Gan Phusion, gan Taq polimerāzes tiek izmantotas PCR mehānismos, lai pastiprinātu DNS.
- Pievienojot polimerāzi reakcijas maisījumam, gan Phusion, gan Taq polimerāzes pievieno pēdējās, lai nodrošinātu fermenta efektivitāti.
- Gan Phusion, gan Taq polimerāzes tiek komerciāli sintezētas molekulārās bioloģijas eksperimentāliem mērķiem.
- Gan Phusion, gan Taq polimerāzēm savas funkcijas veikšanai nepieciešams kofaktors.
Kāda ir atšķirība starp fūziju un Taq polimerāzi?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Fūzija vs Taq polimerāze |
|
| Fūzija ir DNS polimerāze, kas izolēta no Pyrococcus furiosus, un to galvenokārt izmanto klonēšanas eksperimentos, lai palielinātu uzticamību. | Taq DNS polimerāze ir standarta DNS polimerāze, ko izmanto polimerāzes ķēdes reakcijā (PCR), un tā ir izolēta no termostabilās baktērijas Thermus aquaticus. |
| Avots Organisms | |
| Fūziju iegūst no ekstremofīlām arhejām - Pyrococcus furiosus. | Šie literārie darbi aptver no kolonizācijas perioda līdz dekolonizācijas periodam. |
| Pierādījumu lasīšanas spēja | |
| Phusion ir 3 '- 5' korektās lasīšanas spējas. | Taq polimerāzē trūkst 3 '- 5' pierādīšanas spējas. |
| Uzticība | |
| Augsta uzticība pastāv Phusion. | Taq polimerāze parāda zemu precizitāti. |
| Pastiprināšana | |
| Fūzija spēj pastiprināt garus DNS fragmentus. | Taq polimerāze spēj pastiprināt daudz īsākus DNS fragmentus. |
| dUTP saindēšanās | |
| Fūzijas darbību kavē nepāra uzkrāšanās. | TaUP polimerāzi dUPT neinhibē. |
Kopsavilkums - fūzija pret Taq polimerāzi
Fūzija un Taq DNS polimerāze ir divas karstumizturīgas polimerāzes, kuras tiek izmantotas PCR metodēs. Fūzija ir polimerāze, kas izdalīta no ekstremofila Pyrococcus furiosus, savukārt Taq ir izolēta no termostabilām baktērijām Thermus aquaticus. Taq DNS polimerāzes atklāšana noved pie PCR izgudrojuma. Fūzijai ir daudz priekšrocību salīdzinājumā ar Taq, kas Phusion ir padarījis par labāku iespēju augstas precizitātes DNS ražošanai. Tomēr Taq polimerāzi PCR joprojām izmanto kā standarta polimerāzes fermentu. Šī ir atšķirība starp Phusion un Taq polimerāzi.
