Galvenā atšķirība - tiešā vai netiešā ELISA
Ar enzīmiem saistīta imūnanalīze (ELISA), kas pazīstama arī kā enzīmu imūnanalīze, ir seroloģisks tests, kas nosaka antivielas asinīs. To lieto kā diagnostikas rīku, lai noskaidrotu, vai pacients ir bijis pakļauts noteikta veida vīrusam vai citam infekcijas izraisītājam (antigēnam) un vai organisms ir radījis antivielas pret infekciju. ELISA var identificēt arī iepriekšējās un pašreizējās infekcijas. Tāpēc pirms padziļinātas slimību analīzes ārsti bieži izmanto ELISA kā iepriekšēja skrīninga testu. Šo testu var veikt laboratorijā, ņemot pacientam asins paraugu. Ir divu veidu ELISA tests: tiešā ELISA un netiešā ELISA. Galvenā atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA ir tā, ka netiešā ELISA ir jutīgāka un prasa sekundāru antivielu pievienošanu, savukārt tiešā ELISA ir mazāk jutīga un izmanto tikai primāro antivielu.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir tiešā ELISA
3. Kas ir netiešā ELISA
4. Blakus salīdzinājums - tiešā vai netiešā ELISA
5. Kopsavilkums
Kas ir tiešā ELISA?
ELISA ir slimības diagnostikas tests, kas tiek veikts, lai noteiktu noteiktu antigēnu vai antivielu klātbūtni asinīs. To veic kā plāksnes testu. Tas izmanto antivielas, kas saistītas ar viegli pārbaudāmiem enzīmiem. Antigēnu klātbūtne seruma paraugā saistās ar specifiskām antivielām, kas saistītas ar fermentiem. Pēdējā posmā tiek pievienots īpašs substrāts, lai reaģētu ar fermentu. Ferments pārveido substrātu par krāsainu vai signālu radošu produktu. Krāsas izmaiņas ķīmiskajā substrātā atklāj konkrētas antivielas klātbūtni seruma paraugā. Tiešā ELISA testā izmanto tikai primāras antivielas, kas saistītas ar fermentu. Saistoties ar antigēnu, tas ātri maina krāsu, norādot infekcijas izraisītāja klātbūtni asinīs. Tomērsignālu intensitāte ir vājāka tiešajā ELISA, jo epitopi aprobežojas ar antigēnu saistīšanos. Tādējādi tiešā ELISA ir mazāk jutīga, salīdzinot ar netiešo ELISA.
01. attēls: tiešais ELISA tests
Kas ir netiešā ELISA?
ELISA var veikt, izmantojot divu veidu antivielas, proti; primārā antiviela un sekundārā antiviela. Netiešais ELISA rīks izmanto abu veidu antivielas, lai pastiprinātu signālus labākai noteikšanai. Netiešo ELISA metodi veic šādi.
- Plātnes inkubē ar antigēniem un mazgā, lai bloķētu nespecifisko saistīšanos.
- Tad pievieno primārās antivielas un mazgā.
- Pievieno un mazgā ar fermentiem saistītu sekundāro antivielu.
- Pievieno substrātu un ļauj tam reaģēt ar fermentiem.
- Tiek atklāti signāli, un tiek identificēta specifiskā antigēna klātbūtne vai trūkums paraugā.
Netiešā ELISA testā vairākas sekundāras antivielas var saistīties ar vienu primāro antivielu. Sekundārās antivielas ir saistītas ar viegli pārbaudāmiem enzīmiem. Tāpēc viena saistīšanās var dot spēcīgu signālu vairāk nekā vienas mijiedarbības dēļ. Tādējādi netiešā ELISA ir jutīgāka nekā tiešā ELISA. Tomēr netiešā ELISA var dot nespecifiskus signālus sekundāro antivielu krustenisko reakciju dēļ.
02. attēls: Netiešais ELISA tests
Kāda ir atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Tiešā vai netiešā ELISA |
|
| Tiešā ELISA ir mazāk jutīga, salīdzinot ar netiešo ELISA. | Netiešā ELISA ir jutīgāka. |
| Laiks | |
| Tiešais ELISA tests ir ātrs process. | Netiešā ELISA ir laikietilpīga. |
| Antivielu lietošana | |
| Tiešā ELISA metodē izmanto tikai viena veida antivielas (primārās antivielas). | Netiešai ELISA izmanto primārās un sekundārās antivielas. |
| Saikne ar fermentiem | |
| Primārās antivielas ir saistītas ar fermentiem. | Sekundārās antivielas ir saistītas ar fermentiem. |
| Otro antivielu savstarpēja reaktivitāte | |
| Tiešā ELISA novērš otro antivielu krustenisko reaktivitāti. | Netiešo ELISA ietekmē otro antivielu krusteniskā reaktivitāte. |
| Signāli | |
| Signāli ir vāji, salīdzinot ar netiešo ELISA. | Signāli tiek pastiprināti netiešā ELISA metodē. Tādējādi to ir viegli noteikt. |
Kopsavilkums - tiešā vai netiešā ELISA
ELISA ir bioķīmiska tehnika, ko galvenokārt izmanto imunoloģijā, lai noteiktu antivielu vai antigēnu klātbūtni pacienta asins paraugā. To var veikt, izmantojot divus procesus, kas pazīstami kā tieša vai netieša ELISA. Tiešā ELISA testā antigēna noteikšanai tiek izmantotas tikai primārās antivielas, savukārt netiešajā ELISA tiek izmantotas gan primārās, gan sekundārās antivielas. Tiešā ELISA gadījumā primārās antivielas tiek iezīmētas, savukārt netiešajā ELISA - sekundārās antivielas. Šī ir atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA.
