Atšķirība Starp Ziemeļu Dienvidu Un Rietumu Blotēšanu

2024 Autors: Mildred Bawerman | [email protected]. Pēdējoreiz modificēts: 2023-12-16 08:40

Galvenā atšķirība - ziemeļu vs dienvidu vs rietumu blotēšana

Īpašu DNS, RNS un olbaltumvielu secību noteikšana ir būtiska dažāda veida molekulārās bioloģijas pētījumiem. Gēla elektroforēze ir paņēmiens, kas atdala DNS, RNS un olbaltumvielas atbilstoši to lielumam. No gēla profiliem konkrētu DNS secību, RNS secību vai olbaltumvielu nosaka ar īpašām metodēm, ko sauc par blotēšanu un hibridizāciju ar marķētām zondēm. Ir trīs dažādu veidu blotēšanas metodes, proti, dienvidu, ziemeļu un rietumu. Galvenā atšķirība starp ziemeļu dienvidu un rietumu blotēšanu ir saistīta ar molekulas tipu, ko tā nosaka no parauga. Southern blotēšana ir metode, kas nosaka noteiktu DNS sekvenci no DNS parauga. Northern blotting ir paņēmiens, kas no RNS parauga nosaka noteiktu RNS secību. Western blotēšana ir metode, kas nosaka noteiktu olbaltumvielu no proteīna parauga.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības

2. Kas ir Southern Blotting

3. Kas ir Northern Blotting

4. Kas ir Western Blotting

5. Blakus salīdzinājums - Northern vs Southern vs Western Blotting

6. Kopsavilkums

Kas ir Southern Blotting?

Southern bloting tehniku izstrādāja EM Southern 1975. gadā, lai noteiktu DNS sekvenci no DNS parauga. Šī ir pirmā blotēšanas tehnika, kas ieviesta molekulārajā bioloģijā. Tas ļāva noteikt specifiskus gēnus no DNS, specifiskus DNS fragmentus utt. Dienvidu blotēšanas tehnikā ir vairāki posmi. Tie ir šādi.

1. No parauga tiek izolēta DNS un sagremota ar restrikcijas endonukleāzēm.
2. Sagremoto paraugu atdala ar agarozes gēla elektroforēzi.
3. DNS fragmenti gēlā tiek denaturēti atsevišķos pavedienos, izmantojot sārmainu šķīdumu.
4. Vienpavedienu DNS pārnes uz nitrocelulozes filtru membrānu, pārnesot kapilāru.
5. Pārnestā DNS pastāvīgi tiek fiksēta uz membrānas.
6. Fiksētā DNS membrānā tiek hibridizēta ar marķētām zondēm.
7. Nesaistīto DNS mazgā no membrānas.
8. Rentgenstaru filma tiek pakļauta membrānai un tiek sagatavots autoradiogrāfs.

Southern blotting tiek piemērots dažādiem molekulārās bioloģijas aspektiem. Tas ir noderīgi RFLP kartēšanā, kriminālistikas pētījumos, DNS metilēšanā gēnu ekspresijā, mutētu gēnu noteikšanā ģenētisko traucējumu gadījumā, DNS pirkstu nospiedumu noņemšanā utt.

01. attēls: Dienvidu blotēšanas tehnika

Kas ir Northern Blotting?

Northern blotting ir metode, kas paredzēta, lai noteiktu īpašu RNS vai mRNS secību no parauga, lai pētītu gēnu ekspresiju. Šo tehniku izstrādāja Alwine, Kemp un Stark 1979. gadā. Tas atšķiras no skābekļa un rietumu blotēšanas paņēmieniem vairāku soļu dēļ. Tomēr šo paņēmienu veic arī ar gēla elektroforēzi, blotēšanu un hibridizāciju ar specifiski iezīmētām zondēm un noteikšanu. Ziemeļu blotēšanas tehniku veic šādi.

1. RNS ekstrahē no parauga un atdala ar gēla elektroforēzi.
2. RNS no gēla tiek pārnesta uz blotēšanas membrānas un fiksēta.
3. Membrānu apstrādā ar marķētu zondi, kas sagatavota no cDNS vai RNS (zonde ir komplementāra noteiktai parauga secībai).
4. Zondi inkubē ar membrānu, lai saistītos ar noteiktu secību.
5. Nesaistītās zondes tiek nomazgātas.
6. Hibridizētus fragmentus nosaka ar autoradiogrāfu.

Northern blotēšana ir svarīgs līdzeklis hibridizētas mRNS noteikšanai un kvantitatīvai noteikšanai, pētot RNS noārdīšanos, RNS pussabrukšanas perioda novērtēšanu, RNS savienojuma noteikšanu, gēnu ekspresijas pētīšanu utt.

02. attēls: Ziemeļu blotēšana

Kas ir Western Blotting?

Western blot ir metode, kā noteikt olbaltumvielas no olbaltumvielu maisījuma, izmantojot iezīmētas antivielas. Tādēļ Western blot ir pazīstams arī kā imūnblots. Šo tehniku 1979. gadā ieviesa Towbin et al., Un tagad to regulāri veic laboratorijās olbaltumvielu analīzei. Soļi ir šādi.

1. No parauga ekstrahē olbaltumvielas
2. Olbaltumvielas atdala pēc to izmēriem, izmantojot poliakrilamīda gēla elektroforēzi
3. Atdalītās molekulas ar elektroporāciju tiek pārnestas PVDF membrānā vai nitrocelulozes membrānā
4. Membrāna tiek bloķēta nespecifiskai saistīšanai ar antivielām
5. Pārnestās olbaltumvielas ir saistītas ar primārajām antivielām (ar enzīmu iezīmētām antivielām).
6. Membrānu mazgā, lai noņemtu nespecifiski saistītās primārās antivielas
7. Saistītās antivielas tiek noteiktas, pievienojot substrātu un nosakot izveidojušās krāsainās nogulsnes

Western blotēšana ir noderīga, nosakot anti-HIV antivielas cilvēka seruma paraugā. Western blot var izmantot arī kā apstiprinošu testu B hepatīta infekcijai un galīgo testu par govju trakumu.

03. attēls: Western Blotting

Kāda ir atšķirība starp ziemeļu dienvidu un rietumu blotēšanu?

Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas

Ziemeļu vs dienvidu vs rietumu blotēšana
Noteiktais molekulas tips
Ziemeļu blotēšana	Northern blotting no RNS parauga nosaka noteiktu RNS secību.
Southern Blotting	Southern blotting no DNS parauga nosaka noteiktu DNS secību.
Western Blotting	Western blotting nosaka noteiktu proteīnu no olbaltumvielu parauga.
Gela tips
Ziemeļu blotēšana	Tas izmanto Agarose / formaldehīda želeju.
Southern Blotting	Šajā nolūkā tiek izmantots Agarose gēls.
Western Blotting	Tam tiek izmantots poliakrilamīda gēls.
Blotēšanas metode
Ziemeļu blotēšana	Tas ir kapilāru pārvietojums.
Southern Blotting	Tas ir kapilāru pārvietojums.
Western Blotting	Šī ir elektriskā pārsūtīšana.
Izmantotās zondes
Ziemeļu blotēšana	cDNS vai RNS zondes, kas iezīmētas radioaktīvi vai neradioaktīvi.
Southern Blotting	DNS zondes tiek marķētas radioaktīvi vai neradioaktīvi.
Western Blotting	Primārās antivielas tiek izmantotas kā zondes.
Noteikšanas sistēma
Ziemeļu blotēšana	Tas tiek darīts, izmantojot autoradiogrāfu vai gaismas vai krāsas maiņas noteikšanu.
Southern Blotting	Tas tiek darīts, izmantojot autoradiogrāfu, gaismas vai krāsas maiņas noteikšanu.
Western Blotting	Tas tiek darīts, izmantojot gaismas vai krāsas maiņas noteikšanu.

Kopsavilkums - Northern vs Southern vs Western Blotting

Blotēšana ir īpaša tehnika, kas izstrādāta specifiskas DNS, RNS vai olbaltumvielu identificēšanai no paraugiem. Ir trīs atsevišķas blotēšanas procedūras, proti, ziemeļu, dienvidu un rietumu, lai noteiktu noteiktu molekulu tipu. Ziemeļu blotēšanas metode ir paredzēta, lai noteiktu specifisku RNS secību no RNS maisījuma. Southern blot tehnika ļauj noteikt noteiktu DNS sekvenci no DNS parauga, un Western blot tehnika tiek izstrādāta, lai identificētu specifisku olbaltumvielu no olbaltumvielu maisījuma.