Galvenā atšķirība - DNS pret RNS ekstrakciju
DNS un RNS izpēte ir vitāli svarīga, lai izprastu molekulārās bioloģijas, biotehnoloģijas un ģenētikas pamatjēdzienus. Tīru DNS un RNS paraugu ekstrakcija ir nepieciešama, lai veiktu eksperimentālas procedūras šo pētījumu laikā. Galvenā atšķirība starp DNS un RNS ekstrakciju ir tāda, ka DNS ekstrakcijas process attīra DNS, bet RNS ekstrakcija attīra RNS. DNS ekstrakcijas procesam ir trīs dažādi posmi: šūnu lizēšana un membrānas lipīdu un olbaltumvielu katabolisms, katabolītu sasmalcināšana ar koncentrētu sāls šķīdumu un DNS izgulsnēšana ar etanolu. Trīs posmu procedūra var sastāvēt no divām izvēles darbībām. RNS attīrīšanas process sastāv no četriem dažādiem posmiem: guanīdija tiocianāta pievienošana šūnu lizēšanai, olbaltumvielu denaturēšana, ieskaitot ribonukleāzes,RNS atdalīšana, pievienojot hloroformu un fenolu, un nogulsnes mazgājot, izmantojot etanolu.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir DNS ekstrakcija
3. Kas ir RNS ekstrakcija
4. DNS un RNS ekstrakcijas līdzības
5. Blakus salīdzinājums - DNS pret RNS ekstrakciju tabulas veidā
6. Kopsavilkums
Kas ir DNS ieguve?
DNS ieguve ir fizikāls un ķīmisks process, ko izmanto, lai attīrītu DNS no parauga. DNS iegūšana ir svarīgs aspekts molekulārās bioloģijas un tiesu medicīnas jomā. Procesam ir trīs galvenie soļi. Sākumā jāiegūst interesējošās šūnas. Pēc tam tiek atvieglota šūnu lizēšana, lai salauztu šūnas membrānu, kas atver šūnu un atklāj citoplazmu kopā ar DNS. Virsmas aktīvās vielas vai citus mazgāšanas līdzekļus var izmantot lipīdu lizēšanai no šūnu membrānas, kamēr proteāzes katabolizē proteāzes. Šis ir izvēles solis. Kad šūna ir lizēta, katabolizēto molekulu salipšanu veicina koncentrēti sāls šķīdumi. Tam seko šķīduma centrifugēšana, kas atdala gružu gabalus no DNS. Šajā posmādiferencēto DNS sajauc ar šūnu ciklā izmantotajiem reaģentiem un sāļiem.
01. attēls: DNS ekstrakcija
Lai to tālāk attīrītu, varētu izmantot šādas darbības. Viena no metodēm ir etanola nogulsnēšana, kas ietver ledus auksta etanola sajaukšanu ar atdalīto DNS paraugu. DNS nešķīst spirtā un tādējādi rada granulu, pateicoties DNS molekulu agregācijai. Šajā procesā pievieno nātrija acetātu, lai uzlabotu nokrišņu pakāpi, palielinot jonu stiprumu. Papildus etanola nogulsnēšanas procesam tam varētu izraisīt arī fenola un hloroforma ekstrakcijas procesu. Ar šo metodi fenols denaturē proteīnus, kas atrodas paraugā. Pēc centrifugēšanas denaturētie proteīni paliks organiskajā fāzē, savukārt DNS molekulas, kas sajauktas ar hloroformu, atradīsies ūdens fāzē. Hloroforms noņems fenola atlikumus. Kad ekstrakcija ir pabeigta,DNS tiek turēts izšķīdināts TE buferšķīdumā vai īpaši tīrā ūdenī.
Kas ir RNS ekstrakcija?
RNS attīrīšana ir process, kurā RNS tiek attīrīta no bioloģiskā parauga. Ribonukleāzes klātbūtnes dēļ šūnās un audos šis process ir sarežģīts. Ribonukleāzes enzīms spēj ātri noārdīt RNS. Ribonukleāžu ķīmiskais raksturs ir ārkārtīgi stabils, un tos ir grūti inaktivēt. Ribonukleāžu neitralizēšana ir iespēja. Tā kā šis ferments šūnās un audos ir visuresošs, tiek izstrādātas īpašas metodes RNS ekstrakcijai. No daudzajām metodēm parastā metode ir ekstrakcija ar guanidīnija tiocinātu-fenolu-hloroformu.
02. attēls: RNS ekstrakcija
Guanidīnija tiocināta-fenola-hloroforma ekstrakcijas metode ir atkarīga no centrifugēšanas un fāžu atdalīšanas. Centrifugējamais maisījums sastāv no ūdens parauga un ar ūdeni piesātināta šķīduma, kas sastāv no fenola un hloroforma. Pēc centrifugēšanas šķīdums sastāv no augšējās ūdens fāzes un apakšējās organiskās fāzes neitrālā pH apstākļos (pH 7-8). RNS atrodas ūdens fāzē. Organisko fāzi parasti veido proteīni, kas izšķīdināti fenolā, un lipīdi, kas izšķīdināti hloroformā. Pievieno haotropo līdzekli (molekulu, kurai ir iespēja pārtraukt ūdeņraža saites starp ūdens molekulām); to sauc par guanidīnija tiocianātu. Šis līdzeklis spēj denaturēt olbaltumvielas, kas ietver ribonukleāzes, kas var noārdīt RNS un ir iesaistītas šūnu lizā. Tas arī atdala rRNS no ribosomu olbaltumvielām. RNS attīrīšanas pēdējais posms ir ūdens fāzes nogulsnēšanās mazgāšana ar etanolu. RNS varēja arī attīrīt, izmantojot šķidru slāpekli.
Kādas ir DNS un RNS ekstrakcijas līdzības?
- Abos ekstrakcijas procesos izmanto kaitīgas ķīmiskas vielas, piemēram, fenolu un hloroformu.
- Centrifugēšana ir būtisks paņēmiens abiem procesiem.
- Etanolu izmanto, lai mazgātu nogulsnes un iegūtu attīrītu DNS vai RNS.
Kāda ir atšķirība starp DNS un RNS ekstrakciju?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
DNS vs RNS ekstrakcija |
|
| DNS ekstrakcija ir process, kas ekstrahē DNS no organisma vai parauga. | RNS ekstrakcija ir process, kas RNS ekstrahē no parauga. |
| Soļi | |
| DNS ekstrakcijas process sastāv no trim dažādiem posmiem ar diviem izvēles posmiem. | RNS ekstrakcijas process sastāv no četriem dažādiem posmiem. |
| Reaģenti | |
| DNS ekstrakcijai izmanto virsmaktīvās vielas, proteāzes (pēc izvēles), spirtu, hloroformu, fenolu, nātrija acetātu. | RNS ekstrakcijai izmanto guanīdija tiocianātu, hloroformu, fenolu, etanolu. |
Kopsavilkums - DNS vs RNS ekstrakcija
DNS un RNS ekstrakcija ir vitāli svarīgi aspekti eksperimentālajās procedūrās molekulārās bioloģijas, ģenētikas un biotehnoloģijas izpētei. Abos procesos iesaistīti līdzīgi reaģenti, bet RNS ekstrakcijai tiek izmantots īpašs reaģents, kas pazīstams kā Guanidium tiocyanate, kas samazina ribonukleāžu aktivitāti. Šī ir galvenā atšķirība starp DNS un RNS ekstrakciju.
Lejupielādēt DNS un RNS ekstrakcijas PDF versiju
Jūs varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistes vajadzībām, kā norādīts piezīmē. Lūdzu, lejupielādējiet PDF versiju šeit Starpība starp DNS un RNS ekstrakciju
