Galvenā atšķirība - T4 pret T7 DNS ligāzi
DNS ligāze ir svarīgs ferments, ko izmanto molekulārās bioloģijas metodēs. Tas darbojas kā molekulāra līme, lai savienotu nukleotīdus, veidojot fosfodiesteru saites starp nukleotīdiem. Fosfodiesteru saites veidojas starp cukura daļas 3 'hidroksilgrupu un 5'fosfātu grupu. DNS ligāze ir vitāli svarīga replikācijas procesā, lai pievienotos atpaliekošās virknes Okazaki fragmentiem, kā arī DNS remonta mehānismu un in vitro klonēšanas eksperimentu laikā, lai pievienotu vēlamo gēnu, kas interesē vektora genomu. Ir divas galvenās DNS ligāzes, ko pašlaik izmanto molekulārie biologi: T4 un T7 DNS ligāzes. T4 DNS ligāze ir viens no pirmajiem fermentiem, kas izolēts no T4 bakteriofāga. T7 DNS ligāze, kas ir mazāks proteīns, ir ferments, kas izolēts no T7 bakteriofāga. Šī ir galvenā atšķirība starp T4 un T7 DNS ligāzēm.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kāda ir DNS ligāzes darbība
3. Kas ir T4 DNS ligāze
4. Kas ir T7 DNS ligāze
4. Līdzības starp T4 un T7 DNS ligāzi
5. Blakus salīdzinājums - T4 pret T7 DNS ligāzi tabulas veidā
6. Kopsavilkums
Kāda ir DNS ligāzes darbība?
DNS saistīšana notiek trīs posmu reakcijā. Pirmais solis ir nukleofīls uzbrukums ATP alfa fosforam, radot kovalentā enzīma-adenilāta starpproduktu, kurā AMP ir saistīts ar lizīna gala sānu ķēdes slāpekli. Otrajā posmā 5'-fosfāta gala DNS substrāts izraisa nukleofilu uzbrukumu fermenta-adenilāta fosforam, atbrīvojot lizīnu un veidojot DNS-adenilātu. Pēdējā posmā DNS adenilātam uzbrūk citas DNS virknes 3'-OH, atbrīvojot AMP un pievienojoties polinukleotīdiem.
Kas ir T4 DNS ligāze?
T4 ligāze bija pirmā ligāze, kuru izolēja un identificēja Meselsons, Veigle un Kellenbergers, un tā bija pirmā ražotā ligāze. T4 DNS ligāze ir no ATP atkarīgs enzīms, kas katalizē fosfodiesteru saites veidošanos. Tā ir viena polipeptīda ķēde ar 487 aminoskābju atlikumiem un tās molekulmasa ir aptuveni 77 kDa. Optimālais pH tās aktivitātei ir robežās no 7,5 līdz 8.
01. attēls: T4 DNS ligāze
T4 DNS ligāze, kā norāda tās nosaukums, atrodas T4 bakteriofāgā un tika izolēta, kad fāgs ražoja fermentu pēc inficēšanās ar E. coli. Ferments saista divkāršu DNS dupleksus ar neasiem galiem, un saistāmajiem fragmentiem jābūt tuvu viens otram.
Kas ir T7 DNS ligāze?
T7 ligāze ir 41 kDa proteīns, ko ražo T7 Bacteriophage, un tā tiek izolēta, inficējot E. coli šūnas. T7 ligāzes galvenā funkcija ir DNS dupleksu ligēšana caur fosfodiesteru saitēm un klonēšanas eksperimentu laikā pievienoties blakus esošajiem DNS fragmentiem. T7 DNS ligāzes optimālais pH ir robežās no 7,0 līdz 7,2. T7 ligāze ir atkarīga no ATP. T7 DNS ligāzes spēj arī atkvēlināt DNS un RNS hibrīdus, transkripcijas laikā izraisot patoloģiskas konformācijas; tomēr šī parādība joprojām tiek pētīta in vitro pētījumos.
Kādas ir T4 un T7 DNS ligāzes līdzības?
- T4 un T7 DNS ligāze piedalās ligācijas reakcijā, atkvēlinot DNS dupleksus, veidojot fosfodiesteru saiti starp DNS fragmenta 3 'OH galu un 5' fosfāta galu.
- Abi fermenti sasaista neasus DNS dupleksus, kas atrodas tuvu viens otram.
- Abi fermenti ir atkarīgi no ATP.
- Šie fermenti tiek izolēti, inficējot E. coli šūnas ar konkrēto bakteriofāgu.
-
Abu fermentu pielietojums ietver:
- Molekulārā klonēšana - lai piesaistītu vektoram interesējošo gēnu
- DNS labošana - lai salabotu divkāršās nišas
- In vitro DNS replikācija
- Ligāzes ķēdes reakcija
Kāda ir atšķirība starp T4 un T7 DNS ligāzi?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
T4 pret T7 DNS ligāzi |
|
| T4 DNS ligāzes tipa DNS ligāze, kas izolēta no T4 bakteriofāga un ir iesaistīta blakus esošo DNS fragmentu ligēšanā, veidojot fosfodiesteru saiti. | T7 DNS ligāzes tipa DNS ligāze, kas izolēta no T7 bakteriofāga un ir iesaistīta blakus esošo DNS fragmentu ligēšanā, veidojot fosfodiesteru saiti. |
| Olbaltumvielu lielums | |
| T4 DNS ligāzes lielums ir 77 kDa - lielāks, salīdzinot ar T7 DNS ligāzi. | T7 DNS ligāzes lielums ir 41 kDa. |
| Optimālais pH | |
| pH diapazons, kas darbojas T4 DNS ligāzes gadījumā, ir 7,5 - 8,0. | pH diapazons, kas darbojas T7 DNS ligāzes gadījumā, ir 7,0–7,2. |
Kopsavilkums - T4 pret T7 DNS ligāzi
DNS ligāzes ir svarīga enzīmu klase, kas iesaistīta molekulārajā klonēšanā, lai ražotu rekombinantās DNS molekulas, kas satur interesējošo gēnu. Ligācijas reakcija ir enerģiju izmantojoša reakcija, un tiek veikti jauni pētījumi, lai uzlabotu precizitāti, modulējot pieejamās ligāzes. T4 un T7 DNS ligāzes ir divu veidu nozīmīgi DNS ligāzes enzīmi, ko izmanto molekulāri bioloģiskajās metodēs. T7 DNS ligāze ir arī pētījumu rezultāts, kura pamatā bija primārā ligāze, kas izolēta no T4 inficētās E. coli. T7 ir attēlots ar lielāku efektivitāti un precizitāti, pildot savu funkciju, jo tas ir mazāks. Šī ir atšķirība starp T4 un T7 ligāzi.
Lejupielādēt PDF versiju T4 vs T7 DNS Ligase
Jūs varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistes mērķiem, kā norādīts piezīmēs. Lūdzu, lejupielādējiet šeit PDF versiju. Starpība starp T4 un T7 Ligase.
