Galvenā atšķirība - gēla elektroforēze salīdzinājumā ar SDS
Gēla elektroforēze ir paņēmiens, kas elektriskajā laukā atdala makromolekulas. Molekulārajā bioloģijā tā ir izplatīta metode, kā no maisījumiem atdalīt DNS, RNS un olbaltumvielas atbilstoši to molekulārajiem izmēriem. SDS Page ir gēla elektroforēzes veids, ko izmanto, lai atdalītu olbaltumvielas no olbaltumvielu maisījuma, pamatojoties uz to izmēriem. Gēla elektroforēze ir termins, ko lieto, lai atsauktos uz parasto metodi, ko izmanto DNS, RNS un olbaltumvielu atdalīšanai, savukārt SDS Page ir viena veida gēla elektroforēze. Šī ir galvenā atšķirība starp gēla elektroforēzi un SDS.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir gēla elektroforēze
3. Kas ir SDS
4. lapa. Blakus salīdzinājums - gēla elektroforēze pret SDS
5. lpp. Kopsavilkums
Kas ir gēla elektroforēze?
Gēla elektroforēze ir izplatīta metode, ko laboratorijās izmanto, lai no to maisījumiem atdalītu uzlādētas molekulas, piemēram, DNS, RNS, olbaltumvielas utt. Gēla elektroforēzē izmanto gēlu. Tas darbojas kā molekulārais siets. Elektroforēzē ar gēlu izmanto divu veidu želejas, proti, agarozi un poliakrilamīdu. Gēla atlase un gela preparāts ir svarīgi faktori, kas jāņem vērā gēla elektroforēzēs, jo ar gela poru lielumu ir rūpīgi jārīkojas, lai gēla elektroforēze varētu labi atdalīt molekulas. Gēla elektroforēzei ir elektriskais lauks, kas savienots ar diviem gēla galiem. Vienā gēla galā ir pozitīvs lādiņš, bet otrā - negatīvi.
DNS un RNS ir negatīvi lādētas molekulas. Kad tie no gēla negatīvā gala ir ielādēti gēlā un uzklāti uz elektriskā lauka, tie migrē caur gēla porām uz pozitīvi lādēto gēla galu. Migrācijas ātrums ir atkarīgs no molekulas lādiņa un lieluma. Mazākas molekulas viegli migrē caur gēla porām nekā lielākas molekulas. Tādējādi mazākas molekulas iet garu ceļu caur gēlu, bet lielākās molekulas - nelielu attālumu. Lai novērotu molekulu pārvietošanos pa gēlu, tiek izmantoti īpaši krāsvielu veidi. Elektriskais lauks tiek izmantots noteiktu laiku un tiek apturēts, lai novērstu molekulu zudumu un saglabātu molekulas to pārvietotajās pozīcijās. Gēlā var novērot dažādas joslas. Šīs joslas attēlo dažāda lieluma molekulas. Tādējādigēla elektroforēze ir noderīga, lai diferencētu molekulas pēc to lieluma.
Gēla elektroforēze tiek iekļauta dažādās metodēs kā preparatīva metode molekulārajā bioloģijā, piemēram, PCR, RFLP, klonēšana, DNS sekvencēšana, dienvidu blotēšana, genoma kartēšana utt.
01. attēls: Agarozes gēla elektroforēze
Kas ir SDS lapa?
Nātrija dodecilsulfāta poliakrilamīda gēla elektroforēze (SDS lapa) ir gēla elektroforēzes veids, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai. Ja olbaltumvielu atdalīšanai izmanto gēla elektroforēzi, ir nepieciešamas īpašas procedūras, jo olbaltumvielas nav negatīvi uzlādētas, piemēram, DNS un RNS, un tās nemigrē pozitīvā vai negatīvā gala virzienā. Tādējādi proteīni pirms gēla elektroforēzes tiek denaturēti un pārklāti ar negatīvu lādiņu. To veic, izmantojot mazgāšanas līdzekli, ko sauc par nātrija dodecilsulfātu (SDS). Gēla elektroforēze, kas atbalsta SDS izmanto poliakrilamīda gēlu, ir pazīstama kā SDS. Šo metodi parasti izmanto bioķīmijā, ģenētikā, kriminālistikā un molekulārajā bioloģijā.
SDS Page laikā olbaltumvielas tiek sajauktas ar SDS. SDS izvērš olbaltumvielas lineārā formā un pārklāj tos ar negatīvu lādiņu, kas proporcionāls to molekulmasai. Negatīvā lādiņa dēļ olbaltumvielu molekulas migrē uz gēla pozitīvā lādiņa galu un atdalās atbilstoši to molekulmasām. SDS Page poliakrilamīds tiek izmantots kā ciets pamats gēlam. Faktiskā olbaltumvielu atdalīšana galvenokārt ir atkarīga no želejas īpašībām. Tādējādi rūpīgi jāgatavo poliakrilamīda gēls un jāizmanto pareiza poliakrilamīda koncentrācija. Poliakrilamīda gēliem ir augsta izšķirtspēja nekā agarozes gēliem. Tādējādi SDS Page tiek uzskatīts par augstas izšķirtspējas tehniku olbaltumvielu atdalīšanai.
SDS Page ir denaturējošas gēla elektroforēzes veids. Tam ir būtisks ierobežojums olbaltumvielu analīzē. Tā kā SDS pirms atdalīšanas denaturē olbaltumvielas, tas neļauj noteikt fermentatīvo aktivitāti, mijiedarbību ar olbaltumvielām, olbaltumvielu kofaktorus utt.
02. attēls: SDS lapa
Kāda ir atšķirība starp gēla elektroforēzi un SDS lapu?
Gēla elektroforēze pret SDS |
|
| Gēla elektroforēze ir metode, ko veic, lai atdalītu makromolekulas, izmantojot elektrisko lauku. | SDS Page ir augstas izšķirtspējas gēla elektroforēzes paņēmiens, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai, pamatojoties uz to masu. |
| Gel Run | |
| To var veikt horizontālā vai vertikālā veidā. | SDS lapa vienmēr darbojas vertikāli. |
| Atdalīšanas pamats | |
| Atdalīšana notiek atbilstoši lādiņam un izmēram. | Olbaltumvielu atdalīšana notiek pēc masas un lādiņa. |
| Izšķirtspēja | |
| Agarozes gēla elektroforēzei ir zema izšķirtspēja, un poliakrilamīda gēla elektroforēzei ir augstāka izšķirtspēja | SDS lappusei ir labāka izšķirtspēja. |
| Denaturācija | |
| Gēla elektroforēze ietver gan denaturēšanas, gan nedenaturēšanas paņēmienus. | SDS lapa pirms atdalīšanas denaturē olbaltumvielas. |
Kopsavilkums - gēla elektroforēze pret SDS
Gēla elektroforēze ir izplatīta metode, ko izmanto DNS, RNS un olbaltumvielu atdalīšanai un analīzei, pamatojoties uz to lielumu un lādiņu. Ir divi galvenie gēla elektroforēzes veidi, proti, agarozes gēla elektroforēze un poliakrilamīda gēla elektroforēze. Agarozes gēlus galvenokārt izmanto nukleīnskābju atdalīšanai; kad nepieciešama lielāka izšķirtspēja, tiek izmantoti poliakrilamīda gēli. SDS Page ir gēla elektroforēzes veids, ko parasti izmanto, lai atdalītu sarežģītus olbaltumvielu maisījumus. To uzskata par augstas izšķirtspējas olbaltumvielu atdalīšanas tehniku. Šī ir atšķirība starp gēla elektroforēzi un SDS.
