Galvenā atšķirība - kapilārā elektroforēze pret gēla elektroforēzi
Elektroforēze ir paņēmiens, ko izmanto, lai atdalītu biomolekulas, pamatojoties uz daļiņu lādiņu, daļiņu lielumu un daļiņu formu. Molekulas migrācija, kas pazīstama kā elektroforētiskā mobilitāte, ir atkarīga no izmantotā polimēra / gela veida, tā poru lieluma, nodrošinātā sprieguma, darbības laika un virsmas un tilpuma attiecības. Atkarībā no izmantotās biomolekulas veida ir dažādi elektroforēzes paņēmieni. Pirmais izgudrotais elektroforēzes veids bija papīra elektroforēze, kur nitrocelulozes papīru izmantoja kā barotni biomolekulu atdalīšanai. Gēla elektroforēzes princips, kad biomolekulu atdalīšanai tika izmantoti dažāda poru izmēra gēli, tika izgudrots vēlāk. Gela elektroforēzes tehnika tika tālāk modificēta, lai uzlabotu tehnikas precizitāti, un viena no šādām modifikācijām ir kapilārā elektroforēze. Galvenā atšķirība starp kapilāru elektroforēzi un gēla elektroforēzi ir tāda, ka gēla elektroforēzi veic vertikālā vai horizontālā plaknē, izmantojot standarta poru lieluma polimēra gēlu, savukārt kapilāro elektroforēzi veic kapilārā mēģenē ar polimēra šķidrumu vai gēlu.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir gēla elektroforēze
3. Kas ir kapilārā elektroforēze
4. Kapilārās elektroforēzes un gēla elektroforēzes līdzības
5. Blakus salīdzinājums - kapilāru elektroforēze pret gēla elektroforēzi tabulas formā
6. Kopsavilkums
Kas ir gēla elektroforēze?
Gēla elektroforēze ir metode, ko izmanto, lai galvenokārt atdalītu nukleīnskābes, olbaltumvielas vai aminoskābes, pamatojoties uz tās lādiņu, lielumu un formu. Šajā metodē kā atdalīšanas vide tiek izmantots fizikāls gēls, kas ir polimēra viela. Visbiežāk izmantotie gēli ir agaroze (nukleīnskābju atdalīšanai) un poliakrilamīds (olbaltumvielu atdalīšanai). Gēla elektroforētiskais aparāts satur želejas liešanas paplāti gēla sagatavošanai, liešanas ķemmes, lai sagatavotu urbumus, bufera tvertne, elektrodi - pozitīvs (anods) un negatīvs (katods) un sprieguma padeves bloks. Molekulas, piemēram, DNS vai RNS, kas ir negatīvi uzlādētas, pāriet no katoda uz anodu, un pozitīvi uzlādētas molekulas pārvietojas otrādi. Gēla sagatavošana tiek veikta atbilstoši prasībām. Ja nepieciešama augsta izšķirtspēja vai molekulu atdalīšana,jāsagatavo augstas koncentrācijas gēls ar mazāku poru izmēru. Gēla matricā atdalītās molekulas tiek novērotas pēc krāsošanas paņēmiena. Atdalītās molekulas uz gēla matricas parādās kā joslas.
01. attēls: Gēla elektroforēze
Gēla elektroforēzi izmanto molekulārajā diagnostikā, piemēram, DNS pirkstu nospiedumu noņemšanā, lai noteiktu konkrēta DNS / RNS fragmenta vai olbaltumvielu klātbūtni. Gēla elektroforēze nosaka arī ekstrahētā biomolekulas parauga tīrību. Gēla elektroforēzi veic kā sākotnēju ieejas un hibridizācijas posmu un kā apstiprinošu analīzi pēc sekvencēšanas.
Kas ir kapilārā elektroforēze?
Kapilārā elektroforēze ir gēla elektroforēzes modifikācija, kurā tiek izmantots tas pats atdalīšanas princips, pamatojoties uz lādiņu, molekulas lielumu, bet tiek veikta kapilārā mēģenē ar gēla vielu vai šķidru polimēru. Kapilārus sagatavo no kausēta silīcija dioksīda, un katras kapilāras caurules iekšējais diametrs ir 50-100μm un garums ir 25-100cm. Paraugus injicē kapilārajā mēģenē, kas satur polimēra materiālu, un tos atdala daudz ātrāk nekā parastā gēla elektroforēze. Kapilārā sistēma ir labi aizsargāta izolatora apvalka iekšpusē, kas aizsargā paraugu no jebkāda piesārņojuma. Kapilārus var piepildīt ar šķidriem polimēriem, piemēram, hidroksietilcelulozi, vai ar augstas izšķirtspējas gēliem, piemēram, poliakrilamīdu. Kapilārā elektroforēze nodrošina lielāku izšķirtspēju; līdz ar to atdalīšana ir precīzāka. Kapilārā elektroforēze izmanto automatizētu detektoru sistēmu, izmantojot spektrofotometrisko analīzi. Tas ir saistīts ar augstāku virsmas laukuma un tilpuma attiecību.
02. attēls: kapilārā elektroforēze
Kapilāru elektroforēzi izmanto situācijās, piemēram, kriminālistikā, kur nepieciešama lielāka precizitāte, un to parasti neizmanto, jo tā ir dārga tehnika.
Kādas ir kapilārās elektroforēzes un gēla elektroforēzes līdzības?
- Molekulu atdalīšana abās metodēs balstās uz molekulas lādiņu un lielumu.
- Abus paņēmienus var izmantot gan nukleīnskābju, gan olbaltumvielu atdalīšanai.
- Abu metožu parauga tilpums ir vienāds.
- Lai atvieglotu atdalīšanu, abos paņēmienos tiek izmantots buferis.
Kāda ir atšķirība starp kapilāru elektroforēzi un gēla elektroforēzi?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Kapilārā elektroforēze pret gēla elektroforēzi |
|
| Kapilārā elektroforēze ir paņēmiens, kas atdala biomolekulas uz kapilāras caurules, izmantojot šķidru vai gēla polimēra barotni. | Gēla elektroforēze ir paņēmiens, kas atdala biomolekulas vertikālā vai horizontālā plaknē, izmantojot polimēra gēla barotni. |
| Atdalīšana | |
| Kapilāro elektroforēzi atdalīšana tiek veikta kapilāras caurules iekšpusē. | Gēla elektroforēzē atdalīšanu veic uz vertikālas vai horizontālas plaknes. |
| Atdalīšanas vide | |
| Šķidrie polimēri, piemēram, hidroksietilceluloze, tiek izmantoti kapilāru elektroforēzē. | Gēli, vai nu agaroze, vai poliakrilamīds, tiek izmantoti kā barotne gēla elektroforēzē. |
| Šķērssavienojums | |
| Augstu izšķirtspēju var iegūt, veicot kapilāru elektroforēzi. | Gēla elektroforēzes izšķirtspēja ir zema. |
| Virsmas laukuma un tilpuma attiecība | |
| Kapilārā elektroforēzes gadījumā virsmas un tilpuma attiecība ir augsta. | Gela elektroforēzē virsmas un tilpuma attiecība ir zema. |
| Noteikšanas tehnika | |
| Noteikšana tiek veikta, izmantojot automātiskos spektrofotometriskos detektorus kapilāru elektroforēzē. | Krāsošana un novērošana caur UV transiluminatoru tiek veikta kā detektēšanas paņēmieni gēla elektroforēzē. |
Kopsavilkums - kapilārā elektroforēze pret gēla elektroforēzi
Molekulārajai diagnostikai ir galvenā loma zinātnes pasaulē. DNS, RNS un olbaltumvielu identificēšana un attīrīšana ir kritiski svarīgi pasākumi diagnostikas procedūrās. Elektroforēze ir paņēmiens, kas atdala un identificē biomolekulas gan gēla elektroforēzē, gan daudz progresīvajā kapilārā gēla elektroforēzē. Gēla elektroforēzi veic vertikālā vai horizontālā plaknē, izmantojot standarta poru lieluma polimēra gēlu, turpretim kapilāro elektroforēzi veic kapilārā mēģenē ar polimēra šķidrumu vai gēlu. Šī ir atšķirība starp kapilāru elektroforēzi un gēla elektroforēzi. Pabeidzot elektroforēzes tehniku, biomolekulas tiek tālāk apstrādātas, lai iegūtu augstāka līmeņa informāciju, izmantojot hibridizāciju vai tādas metodes kā pirkstu nospiedumu noņemšana.
Lejupielādēt kapilārās elektroforēzes un gēla elektroforēzes PDF versiju
Jūs varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistes vajadzībām, kā norādīts piezīmē. Lūdzu, lejupielādējiet PDF versiju šeit Starpība starp gēla elektroforēzi un kapilāro elektroforēzi.
