Galvenā atšķirība - papīra un plāna slāņa vs kolonnu hromatogrāfija
Papīra hromatogrāfija, plānā slāņa hromatogrāfija un kolonnu hromatogrāfija ir trīs veidu hromatogrāfijas paņēmieni. Galvenā atšķirība starp papīra hromatogrāfiju, plānu kārtu hromatogrāfiju un kolonnu hromatogrāfiju ir balstīta uz stacionārās fāzes veidu, ko izmanto hromatogrāfijas tehnikā. Papīra hromatogrāfijā kā stacionārā fāze tiek izmantots celulozes papīrs, plānā slāņa hromatogrāfijā kā stacionārā fāze tiek izmantots alumīnija oksīds vai silikagels, savukārt kolonnu hromatogrāfijā kā stacionārā fāze tiek izmantota kolonna, kas pildīta ar piemērotu matricas materiālu.
Biomolekulu, piemēram, olbaltumvielu un ogļhidrātu, atdalīšanas un identifikācijas procesā hromatogrāfija ir svarīga izmantotā biofizikālā tehnika. Hromatogrāfija atdala savienojumus, pamatojoties uz to šķīdību, lielumu un lādiņu. Pamatojoties uz atdalīšanas mehānismu, hromatogrāfijā tiek izmantoti tādi mehānismi kā jonu apmaiņa, absorbcija, sadalīšanās un izmēru izslēgšana, un ir trīs hromatogrāfijas paņēmieni; proti, papīra, plānā slāņa un kolonnu hromatogrāfija. Papīra hromatogrāfijas pamatā ir savienojuma cietā-šķidruma adsorbcija un šķīdība, un kā stacionāro fāzi izmanto celulozes papīru. Plāno slāņu hromatogrāfijas pamatā ir molekulu adsorbcija ar cietu šķidrumu. Tam ir stacionāra fāze, kas parasti ir izgatavota no alumīnija oksīda vai silikagela, un kustīgā fāze, kas ir šķīdinātājs. Kolonnu hromatogrāfijā izmanto kolonnu, kas pildīta ar matricu, ko izmanto molekulu atdalīšanai, galvenokārt pamatojoties uz to lielumu, afinitāti vai tās lādiņu.
SATURS
1. Pārskats par hromatogrāfiju un galvenajām atšķirībām
2. Kas ir papīra hromatogrāfija
3. Kas ir plānā slāņa hromatogrāfija
4. Kas ir kolonnu hromatogrāfija
5. Papīra, plānā slāņa un kolonnu hromatogrāfijas līdzības
6. Blakus salīdzinājums - papīrs pret plāno slāni vs Kolonnu hromatogrāfija tabulas formā
7. Kopsavilkums
Kas ir papīra hromatogrāfija?
Papīra hromatogrāfija ir vienkāršākais izmantotais hromatogrāfijas veids, un to neizmanto plašiem pētījumiem. To galvenokārt izmanto studentu laboratorijās, lai identificētu biomolekulas, piemēram, aminoskābes un ogļhidrātus, kas atrodas maisījumos. Papīra hromatogrāfijā tiek izmantota stacionāra fāze, kas tiek izgatavota, izmantojot celulozes papīru vai Whatman filtrpapīru, un kustīgā fāze, kuru parasti sagatavo, izmantojot organiskos šķīdinātājus, piemēram, n-butanolu utt. Stacionārā fāze ir piesātināta ar ūdeni, padarot stacionāro fāzi šķidru. Tādējādi, kad savienojumi tiek pamanīti un ļauti darboties kustīgās fāzes klātbūtnē, atkarībā no savienojumu šķīdības tie tiek atdalīti. Tādējādi, izstrādājot hromatogrammu, var veikt krāsošanu, lai noteiktu katra savienojuma garumu. Tādējādi var aprēķināt aiztures koeficientu.
01. attēls: papīra hromatogrāfija
Papīra hromatogrāfiju var turpmāk klasificēt kā augšupejošu papīra hromatogrāfiju un lejupejošu papīra hromatogrāfiju atkarībā no darbojošā šķīdinātāja virziena.
Kas ir plānā slāņa hromatogrāfija?
Plāno slāņu hromatogrāfija vai TLC ir parasti izmantota tehnika dažādu aminoskābju identificēšanai maisījumā vai olbaltumvielu identificēšanai. Atdalīšanas paņēmiens ir balstīts uz cietā-šķidruma adsorbciju. Plāno slāņu hromatogrāfijas laikā kā stacionāro fāzi izmanto plāksni, kas izgatavota no alumīnija oksīda vai silikagela. Šķīdinātāja maisījums mainās atkarībā no prasības un šķīdinātāja pagatavošanai var izmantot dažādas organisko savienojumu kombinācijas, piemēram, n-butanolu, etiķskābi un ūdeni. Atdalāmie savienojumi tiek pamanīti uz plāksnes un iegremdēti šķīdinātāja maisījumā. Kad šķīdinātājs pārvietojas uz augšu, pamatojoties uz plāksnes sniegto kapilāro darbību, uz plāksnes pamanītie savienojumi pārvietojas arī atkarībā no to šķīdības šķīdinātājā.
02. attēls: plānā slāņa hromatogrāfija
Plankumus nosaka pēc hromatogrammas, izmantojot dažādas krāsošanas procedūras. Daži izmanto ninhidrīna krāsošanu, kas ir diezgan toksiska krāsošanas metode. Mūsdienu plānā slāņa hromatogrammās tiek izmantotas fluorescences metodes, lai apskatītu hromatogrammu pēc skrējiena. Atkarībā no tā nobrauktajiem attālumiem var aprēķināt katra savienojuma aiztures laiku. To var izmantot, lai noteiktu savienojuma veidu, kas atdalīts, pamatojoties uz izmantoto maisījumu. TLC galvenokārt izmanto, lai identificētu aminoskābes olbaltumvielu maisījumā, kā arī atdalītu dažāda veida maisījumā esošos monosaharīdus.
Kas ir kolonnu hromatogrāfija?
Kolonnu hromatogrāfija ir plašs termins, ko lieto, lai aprakstītu daudzu veidu hromatogrāfijas paņēmienus, kuros izmanto kolonnās balstītu atdalīšanas metodi. Kolonnu hromatogrāfijā savienojumu atdalīšanai izmanto fizisku kolonnu ar iepakojuma materiālu. Atdalīšana var būt balstīta uz dažādām savienojumu fizikālajām īpašībām. Šīs īpašības var būt lādiņš, izmērs, 3D konformācija un saistīšanās spēja utt. Tādējādi kolonna, kas pildīta ar matricas materiālu, darbojas kā stacionārā fāze, un kolonnai uzliktais mazgāšanas buferis darbojas kā kustīgā fāze.
Ja molekulas tiek atdalītas, pamatojoties uz lielumu, iepakojuma materiāls tiek iesaiņots tā, lai tas atstātu poras savienojumu ceļošanai. Tādējādi vispirms tiek eluētas lielākas molekulas, kuras nevar plūst caur porām, savukārt mazākām molekulām eluēšana prasa daudz ilgāku laiku.
03. attēls: kolonnu hromatogrāfija
Ja molekulas tiek atdalītas, pamatojoties uz to lādiņu, stacionārā fāze satur vai nu anjonu, vai katjonu apmaiņas ierīci, kurai savienojumus piesaistīs, pamatojoties uz to lādiņu. Tādējādi mazgāšanas posmā nesaistītie savienojumi tiks eluēti. Pievienojot eluēšanas buferi, piesaistītie lādētie savienojumi tiks eluēti. Šo eluentu noteikšana galvenokārt balstās uz spektrofotometriskām metodēm.
Kādas ir papīra plānā slāņa un kolonnu hromatogrāfijas līdzības?
- Biomolekulu, piemēram, aminoskābju, olbaltumvielu un ogļhidrātu, atdalīšanai tiek izmantotas visas papīra plānā slāņa un kolonnu hromatogrāfijas trīs metodes.
- Papīra plānā slāņa un kolonnas hromatogrāfijas metodēm ir kustīga fāze un stacionāra fāze.
- Papīra plānā slāņa un kolonnu hromatogrāfijas metodēs atdalīšanai tiek izmantoti biofizikālie mehānismi.
Kāda ir atšķirība starp papīra plāno slāni un kolonnu hromatogrāfiju?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Papīra un plāna slāņa vs kolonnas hromatogrāfija |
|
| Papīra hromatogrāfija | Papīra hromatogrāfija ir hromatogrāfijas metode, ko izmanto, lai atdalītu savienojumus, pamatojoties uz šķidruma-šķidruma adsorbciju un savienojuma šķīdību. Tā kā celulozes fāzi izmanto celulozes papīru. |
| Plāna slāņa hromatogrāfija | Plāno slāņu hromatogrāfija ir vēl viena hromatogrāfijas metode, kuras pamatā ir molekulu cietā-šķidruma adsorbcija. Tam ir stacionāra fāze, kas izgatavota no alumīnija oksīda vai silikagela, un kā kustīgā fāze ir šķīdinātājs, kas ir šķīdinātājs. |
| Kolonnu hromatogrāfija | Kolonnu hromatogrāfijā izmanto kolonnu, kas pildīta ar matricu, ko izmanto molekulu atdalīšanai, galvenokārt pamatojoties uz to lielumu, afinitāti vai tās lādiņu. |
| Stacionārā fāze | |
| Papīra hromatogrāfija | Papīrs, kas izgatavots no Whatman nitrocelulozes, tiek izmantots kā stacionārā fāze papīra hromatogrāfijā. |
| Plāna slāņa hromatogrāfija | Alumīnija oksīdu vai silikagelu izmanto kā plānā slāņa hromatogrāfijas stacionāro fāzi. |
| Kolonnu hromatogrāfija | Kolonnu hromatogrāfijā kā stacionāro fāzi izmanto kolonnu, kas pildīta ar piemērotu iepakojuma materiālu. |
| Mobilā fāze | |
| Papīra hromatogrāfija | Braukšanas šķīdinātājs ir papīra hromatogrāfijas kustīgā fāze. |
| Plāna slāņa hromatogrāfija | Braukšanas šķīdinātājs ir plānā slāņa hromatogrāfijas kustīgā fāze. |
| Kolonnu hromatogrāfija | Mazgāšanas buferis ir kolonnas hromatogrāfijas kustīgā fāze. |
| Atdalīšanai izmantotie mehānismi | |
| Papīra hromatogrāfija | Papīra hromatogrāfijas pamatā ir cietā šķidruma absorbcija. |
| Plāna slāņa hromatogrāfija | Plāno slāņu hromatogrāfijas pamatā ir cietā šķidruma absorbcija. |
| Kolonnu hromatogrāfija | Kolonnu hromatogrāfijas pamatā ir izmēru izslēgšana, lādiņš un forma. |
| Elucēšanas buferis | |
| Papīra hromatogrāfija | Nav nepieciešama papīra hromatogrāfijā. |
| Plāna slāņa hromatogrāfija | Plāno slāņu hromatogrāfijai nav nepieciešams. |
| Kolonnu hromatogrāfija | Nepieciešams kolonnu hromatogrāfijā. |
| Atklāšana | |
| Papīra hromatogrāfija | Krāsošana un nosakot aiztures koeficientu. |
| Plāna slāņa hromatogrāfija | Krāsošana un nosakot aiztures koeficientu. |
| Kolonnu hromatogrāfija | Spektrofotometriskā noteikšana. |
Kopsavilkums - papīra plānā slāņa un kolonnas hromatogrāfija
Papīra hromatogrāfija, TLC un kolonnu hromatogrāfija ir atdalīšanas paņēmieni, ko izmanto, lai atdalītu tādas biomolekulas kā olbaltumvielas, aminoskābes un ogļhidrāti (galvenokārt monosaharīdi). Papīra hromatogrāfijā kā stacionārā fāze tiek izmantots celulozes papīrs, un atdalīšanas mehānisms ir balstīts uz cieta-šķidruma adsorbciju. TLC izmanto arī cietu šķidrumu adsorbcijas mehānismus. Stacionārajā fāzē molekulas tiek atdalītas atkarībā no to šķīdības kustīgajā fāzē. Kolonnu hromatogrāfijā atdalīšanai tiek izmantotas tādas fizikālās īpašības kā lielums, forma, lādiņš un savienojuma molekulmasa. Kolonna, kas pildīta ar matricas materiālu, darbojas kā stacionārā fāze, bet mazgāšanas buferis - kā šķīdinātāja fāze. Šī ir atšķirība starp papīra plāno slāni un kolonnu hromatogrāfiju.
