Galvenā atšķirība - želejas sakraušana pret želejas atdalīšanu
SDS-PAGE tehnikas skaidrojumā tiek izmantoti termini kraušanas gēls un atdalošais gēls. Elektroforēze ar SDS-PAGE vai nātrija dodecilsulfāta-poliakrilamīda želeju ir laboratorijas metode, ko izmanto olbaltumvielu molekulu atdalīšanai, pamatojoties uz to molekulmasu. Tehnikas teorija ir tāda, ka olbaltumvielas ar dažādu molekulmasu uzrāda atšķirīgus migrācijas ātrumus; zemas molekulmasas molekulas migrē ātrāk, savukārt lielas molekulmasas - lēni. Migrācijas vide ir želeja. Ir divu veidu želejas, ko sauc par kraušanas želeju un atdalošo želeju. Galvenā atšķirība starp sakraušanas gēlu un atdalošo gēlu ir tāda, ka kraušanas gēla pH ir 6,8, bet atdalošā gela pH ir 8,8.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir želejas sakraušana
3. Kas ir želejas atdalīšana
4. Sakarība starp sakraušanas gēlu un želejas atdalīšanu
5. Blakus salīdzinājums - Želejas sakraušana vs želejas atdalīšana tabulas veidā
6. Kopsavilkums
Kas ir kraušanas želeja?
Stacking gel ir mazkoncentrēts poliakrilamīda gēls, kas SDS-PAGE tehnikā tiek novietots uz koncentrētāka izšķirtspējas gēla (separācijas gēla) augšdaļas. Kraušanas želeju izmanto, lai uzlabotu elektroforēzes izšķirtspēju. Izšķirtspēja palielinās, jo ir atšķirība starp sakraušanas gēla un izšķīdināšanas gēla koncentrāciju, kas ietekmē parauga olbaltumvielas. Tā kā poliakrilamīda koncentrācija kraušanas želejā ir zema, poru izmērs ir lielāks. Tas arī palīdz palielināt atdalīšanu.
Stāvēšanas želeja ir vaļīgs poliakrilamīda gēls ar lielām porām ar apmēram 7% poliakrilamīdu. Šīs poras nedarbojas kā ievērojams šķērslis lielām olbaltumvielu molekulām. Tādējādi šis gēls nedaudz ietekmē šo olbaltumvielu mobilitāti. Tas padara atdalīšanu atbilstoši olbaltumvielu mobilitātei un lielumam, koncentrējot tos starp diviem gēliem.
01. attēls: SDS-PAGE akrilamīda gēls
Krāvēja gela pH ir 6,8. Tā pH ir skābs nekā gēla izšķīdināšanai ar 2 pH vienībām. Šis pH nozīmē zemāku jonu stiprumu, līdz ar to lielāku elektrisko pretestību. Tas provocē olbaltumvielu mobilitāti nekā citas uzlādētas daļiņas, kas atrodas želejā.
Kas ir atdalošais gēls?
SDS-PAGEtechnique atdalošais gēls vai izšķirošais gēls ir ļoti koncentrēts poliakrilamīda gēls, kas tiek novietots uz zemas koncentrācijas sakraušanas želejas augšdaļu. Atdalošais gēls satur lielu daudzumu poliakrilamīda (10%). Šī gela pH tiek uzturēts kā pH = 8,8, kas ir augstāks pH līmenis nekā kraušanas gēlam.
02. attēls: Gēla elektroforēzes aparāts
Kad olbaltumvielu molekulas nonāk atdalošajā gēlā, šo molekulu migrācija tiek palēnināta, jo atdalošais gēls ir augstas koncentrācijas gēls ar nelielu poru izmēru, kas var darboties kā ievērojams šķērslis olbaltumvielu molekulu kustībai. Šis palēninājums ļauj pārējiem olbaltumvielām lēnām migrēt, lai panāktu, kā rezultātā starp diviem gēliem izveidojas šaura, koncentrēta josla.
Kāda ir saistība starp želejas sakraušanu un želejas atdalīšanu?
Gan Stacking Gel, gan Separating Gel tipus izmanto vienā aparātā
Kāda ir atšķirība starp želejas sakraušanu un želejas atdalīšanu?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Želejas sakraušana vs atdalošais gēls |
|
| Stacking gel ir mazkoncentrēts poliakrilamīda gēls, kas SDS-PAGE tehnikā tiek novietots uz koncentrētāka izšķirtspējas gēla (separācijas gēla) augšdaļas. | SDS-PAGE paņēmiena atdalošais gēls vai izšķirošais gēls ir ļoti koncentrēts poliakrilamīda gēls, kas tiek novietots uz zemu koncentrētu sakraušanas gēla augšdaļu. |
| Izvietošana | |
| Uz izšķirošā (atdalošā) gela tiek ievietots sakraušanas gēls. | Atdalošais gēls tiek novietots uz trauka dibena, ko izmanto gēla elektroforēzei. |
| Koncentrēšanās | |
| Kraušanas želejas koncentrācija ir augsta. | Atdalošā gēla koncentrācija ir zema. |
| Poliakrilamīda saturs | |
| Stacking gel satur apmēram 7% poliakrilamīda. | Atdalošais gēls satur apmēram 10% poliakrilamīda. |
| pH | |
| Krāvēja gela pH ir 6,8. | Atdalošā gela pH ir 8,8. |
| Poras lielums | |
| Liels poru izmērs ir sastopams sakraušanas želejā. | Atdalošajā želejā ir mazi poru izmēri. |
| Izšķirtspēja | |
| Stacking gel nodrošina labāku izšķirtspēju. | Gela atdalīšana dod sliktu izšķirtspēju. |
Kopsavilkums - želejas sakraušana vs atdalošais gēls
Kraušanas gēls un atdalošais gēls ir divu veidu poliakrilamīda gēli, ko izmanto, lai panāktu labāku olbaltumvielu molekulu atdalīšanu dotajā paraugā. Atšķirība starp sakraušanas gēlu un atdalošo gēlu ir tāda, ka kraušanas gēla pH ir 6,8, bet atdalošā gela pH ir 8,8.
