Galvenā atšķirība - klonēšana vs subklonēšana
Klonēšana un subklonēšana ir molekulāri bioloģiskas procedūras, kas rada ģenētiski identiskas šūnas vai organismus ar DNS vai gēnu, kas interesē. Klonēšana ir paņēmiens, kas ietver ieinteresētā gēna vai DNS ievietošanu vektorā, tā replikāciju saimniekbaktērijā un šūnu vai organismu ražošanu, kas ir precīzas ģenētiskā sastāva kopijas. Subklonēšana ir paņēmiens, kas ietver attiecīgā gēna, kas jau ir ievietots vektorā, ievietošanu sekundārajā vektorā, tā replikāciju saimniekbaktērijā un ģenētiski identisku šūnu vai organismu kopiju ražošanu. Galvenā atšķirība starp klonēšanu un subklonēšanu ir tāda, ka klonējot interesējošais gēns, kad tas ir ligēts vektorā, turpina klonēšanas procesu, bet subklonēšanājau klonētais interesējošais gēns tiek atdalīts no vecāku vektora un atkal ievietots saņēmēja vektorā un turpina procesu.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir klonēšana
3. Kas ir subklonēšana
4. Blakus salīdzinājums - Klonēšana vs subklonēšana
5. Kopsavilkums
Kas ir klonēšana?
Klonēšana ir procedūra, kas ražo ģenētiski identiskus organismus vai šūnas. Dabā klonēšana notiek bezdzimuma reprodukcijas veidā. Ja nav ģenētiskas rekombinācijas vai izmaiņas, meitas šūnas saņem tādu pašu vecāku ģenētisko sastāvu. Prokariotu un eikariotu organismi veido klonus, izmantojot bināro šķelšanos, dīgšanu, mitozi utt. Molekulārajā bioloģijā gēnu vai specifisku DNS fragmentu klonēšana ir populāra metode, lai pētītu konkrētās DNS sekcijas struktūru un funkcijas.
Molekulārās klonēšanas galvenais mērķis ir izgatavot miljoniem tādu ģenētiski identisku šūnu vai organismu kopiju, kas satur interesējošo DNS fragmentu (galvenokārt gēnus). Tas rada organismus ar precīzām citu ģenētiskām kopijām. Molekulāros pētījumos galvenokārt tiek klonēti specifiski gēni, lai iegūtu strukturālu un funkcionālu informāciju un DNS sekvencēšanu. Arī specifisku olbaltumvielu vai produktu ražošanai plašā mērogā plaši tiek izmantota klonēšana.
Klonēšanas procedūra
Klonēšanas procedūras galvenie soļi ir šādi.
- Interesējošā gēna identificēšana un izolēšana. (Interesējošā gēna pastiprināšana ar PĶR).
- Interesējošā gēna ierobežojošā šķelšana (restrikcijas endonukleāze sagriež gēnu).
- Vektora DNS ierobežošana. (Vektoru DNS arī sagriež, izmantojot to pašu restrikcijas endonukleāzi).
- Gēna ievietošana vektorā un rekombinantās molekulas veidošanās.
- Rekombinantā vektora pārveidošana par saimniekbaktēriju.
- Transformēto baktēriju izolēšana un identificēšana (plazmīda vektorā jābūt atlasāmam gēnam, visbiežāk antibiotiku rezistences gēnam, lai pārbaudītu transformētās baktērijas).
- Rekombinantā gēna ekspresija saimniekorganismā.
Attēls_01: Klonēšanas procedūra
Kas ir subklonēšana?
Subklonēšana ir procedūra, ar kuru interesējošo gēnu pārvieto no viena vektora uz citu vektoru, lai redzētu gēna izpausmi, lai iegūtu vēlamo gēna funkcionalitāti. Šajā metodē ir iesaistīti divi vektori; proti, vecāku vektors un mērķa vektors. Klonētie ieliktņi atkal tiek pārvietoti otrajā vektorā subklonēšanā. Gēna pārvietošanas no pirmā vektora uz otro vektoru mērķis ir iegūt kaut ko tādu, ko nevarēja izdarīt pirmais vektors, vai atkal atdalīt gēnu jau klonētajā DNS fragmentā un izteikt to atsevišķi. Sākotnēji šajā procedūrā tiek izmantoti ierobežojošie enzīmi.
Subklonēšanas procedūra
Subklonēšanas galvenie soļi ir šādi.
- Ar restrikcijas endonukleāžu palīdzību interesējošās DNS atdalīšana donora plazmīdā (vecāku vektorā).
- Interesējošās DNS pastiprināšana, izmantojot PCR.
- PCR produkta (interesējošās DNS) attīrīšana ar gēla elektroforēzi.
- Saņēmēja plazmīdas atvēršana ar tādām pašām restrikcijas endonukleāzēm, ko izmanto, lai nošķirtu interesējošo DNS vecākajā plazmīdā.
- Interesējošās DNS (gēna) sasaistīšana recipienta plazmīdā, lai izveidotu subklonēto plazmīdu.
- Subklonētā vektora pārveidošana par kompetentu saimniekbaktēriju.
- Transformēto šūnu skrīnings.
- Plazmīdas DNS attīrīšana un izmantošana DNS sekvencēšanai vai gēnu ekspresijai, lai iegūtu vēlamos produktus.
Subklonēšana tiek veikta gadījumos, kad tiek izolēts viens gēns no klonētās gēnu grupas vai kad interesējošais gēns ir jāpārvieto noderīgā plazmīdā, lai redzētu precīzu interesējošā gēna funkciju.
Attēls_02: subklonēšanas procedūra
Kāda ir atšķirība starp klonēšanu un subklonēšanu?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Klonēšana vs subklonēšana |
|
| Klonēšana ir procedūra, kas ražo ģenētiski identiskus organismus vai šūnas. | Subklonēšana ir procedūra, ar kuru interesējošo gēnu pārvieto no viena vektora uz citu vektoru, lai redzētu gēna izpausmi, lai iegūtu vēlamo gēna funkcionalitāti. |
| Process | |
| Atdaliet interesējošo DNS no organisma un vienu reizi ievietojiet vektorā un klonējiet | Jau klonētā DNS tiek atdalīta no pirmā vektora, ievietota otrajā vektorā un klonēta. |
| Ievietojiet kustību caur vektoriem | |
| Nepārvieto ieliktņus (interesējošo DNS) no viena vektora uz citu vektoru. | Pārvietojiet ieliktņus no vecāku vektora uz galamērķa vektoru. |
Kopsavilkums - klonēšana vs subklonēšana
Klonēšana rada ģenētiski identiskas šūnas vai organismus ar ievietoto gēnu vai DNS, kas interesē. Tas notiek, atdalot un ievietojot interesējošo DNS vektorā un ekspresējot saimniekbaktērijā. Subklonēšanai ir līdzīgas darbības ar klonēšanu. Tomēr subklonējot jau klonētu DNS fragmentu (interesējošo gēnu) ievieto vektorā un pārveido par saimniekbaktēriju. Tā ir galvenā atšķirība starp klonēšanu un subklonēšanu.
