Galvenā atšķirība - Nick Translation vs Primer Extension
Nika tulkošana un grunts pagarināšana ir divas svarīgas metodes, kas tiek veiktas molekulārajā bioloģijā. Galvenā atšķirība starp nika translāciju un grunts pagarinājumu ir tāda, ka nika translācijas process rada marķētas zondes citām hibridizācijas metodēm, savukārt primer pagarināšanas metode identificē specifisku RNS secību no maisījuma un atklāj informāciju par mRNS ekspresiju. Abiem paņēmieniem ir liela nozīme, un tos regulāri veic molekulāro pētījumu laboratorijās.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir nika tulkošana
3. kas ir grunts paplašinājums
4. Blakus salīdzinājums - nika tulkošana un grunts pagarinājums
5. Kopsavilkums
Kas ir Nika tulkošana?
Nika tulkošana ir svarīgs paņēmiens, ko izmanto, lai sagatavotu iezīmētas zondes dažādām molekulāri bioloģiskām metodēm, piemēram, blotēšanai, in situ hibridizācijai, fluorescējošai in situ hibridizācijai utt. Tā ir in vitro DNS marķēšanas metode. DNS zondes izmanto, lai identificētu specifiskas DNS vai RNS sekvences. Ar marķētas zondes palīdzību no kompleksā nukleīnskābes maisījuma var iezīmēt vai vizualizēt specifiskus fragmentus. Tāpēc marķētas zondes tiek sagatavotas, izmantojot dažādas metodes, kas izmantojamas dažādām metodēm. Nika tulkošana ir viena no šādām metodēm, kas ražo marķētas zondes ar DNase 1 un DNS polimerāzes 1 enzīmu palīdzību.
Nika tulkošanas process sākas ar DNase 1 enzīma aktivitāti. DNase 1 ievada niķus divkāršās DNS fosfāta mugurkaulā, sadalot fosfodiesteru saites starp nukleotīdiem. Kad segvārds ir izveidots, tiks iegūta brīva nukleotīda 3 'OH grupa, un uz to iedarbosies DNS polimerāzes 1 enzīms. No 5 'līdz 3' DNS polimerāzes 1 eksonukleāzes aktivitāte noņem nukleotīdus no nika pret DNS virknes 3 'virzienu. Vienlaicīgi darbojas DNS polimerāzes 1 enzīma polimerāzes aktivitāte un pievieno nukleotīdus, lai aizstātu noņemtos nukleotīdus. Ja nukleotīdi tika marķēti, aizvietošana notiks ar iezīmētajiem nukleotīdiem, un tā iezīmēs DNS identifikācijai. Šo nesen sintezēto iezīmēto DNS var izmantot kā zondes dažādās hibridizācijas reakcijās molekulārajā bioloģijā.
01. attēls: Nika tulkošanas process
Kas ir Primer Extension?
Primer pagarināšana ir paņēmiens, ko izmanto, lai atrastu specifisku RNS secību no RNS maisījuma un atrastu mRNS transkripta 5 'galu. To izmanto arī RNS struktūras un ekspresijas izpētei. Primer pagarināšanas metodi veic ar iezīmētiem grunts vai ar iezīmētiem nukleotīdiem. Ja tiek izmantoti marķēti grunti, tas izslēdz nepieciešamību marķēt nukleotīdus, kurus izmanto cDNS sintēzei. Šajā tehnikā ir vairākas darbības. Tas sākas ar RNS ekstrakciju no parauga. Tad maisījumam pievieno marķētu oligonukleotīda grunti kopā ar nepieciešamajām sastāvdaļām, lai sintezētu specifiskas RNS sekvences cDNS. Primer piesaista ar maisījuma papildinošo secību. Kā veidni izmantojot grunts grunti atkausētu secību,enzīma reversā transkriptāze sintezē RNS secības komplementāro DNS (cDNS). Primer atlaidināšana un reversā transkripcija notiek tikai tad, kad paraugā ir specifiskā RNS secība. Visbeidzot, veicot denaturējošu gēla elektroforēzi, var noteikt RNS secības lielumu. Ar primer pagarināšanas metodi ir arī viegli atrast mRNS (transkripcijas iniciācijas vietas) secības +1 bāzi. Ar šo metodi var noteikt kvantitatīvi paraugā esošās mRNS daudzumu, ja tiek izmantots liekais grunts. Ar primer pagarināšanas metodi ir viegli atrast arī mRNS (transkripcijas iniciācijas vietas) secības +1 bāzi. Ar šo metodi var noteikt kvantitatīvi paraugā esošās mRNS daudzumu, ja tiek izmantots liekais grunts. Ar primer pagarināšanas metodi ir viegli atrast arī mRNS (transkripcijas iniciācijas vietas) secības +1 bāzi. Ar šo metodi var kvantitatīvi noteikt paraugā esošās mRNS daudzumu, ja tiek izmantots pārpalikums.
02. attēls: Grunts pagarinājums
Kāda ir atšķirība starp Nick Translation un Primer Extension?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Nick Translation vs Primer paplašinājums |
|
| Nika tulkošana ir process, kas rada iezīmētas DNS zondes dažādām hibridizācijas reakcijām. | Primer pagarināšana ir paņēmiens, ko izmanto, lai atrastu specifisku RNS vai pētītu gēnu ekspresiju. |
| Izmantotie fermenti | |
| Tiek izmantoti DNase 1 un DNS polimerāzes fermenti. | Tiek izmantots reversās transkriptāzes ferments. |
| Svarīgums | |
| Nika tulkošana atvieglo specifiskas DNS sekvences marķēšanu. | Primer pagarinājums ļauj noteikt specifisku mRNS secības lielumu un paraugā esošo daudzumu. |
Kopsavilkums - Nick Translation vs Primer Extension
Nika tulkošana ir metode, ko izmanto iezīmētu zondu sintezēšanai, pamatojoties uz DNase 1 un E coli DNS polimerāzes 1 enzīmu aktivitātēm. Tā ir in vitro metode, ko laboratorijās izmanto pirms dažādām hibridizācijas metodēm. Nika tulkošanas laikā DNS polimerāzes 1 5'-3 'eksonukleāzes aktivitāte noņem nukleotīdus pirms nika, un DNS polimerāzes 1 polimerāzes aktivitāte aizstāj noņemtos nukleotīdus ar iezīmētiem nukleotīdiem aiz nika. Primer pagarināšana ir metode, ko izmanto, lai noteiktu īpašu RNS transkriptu no maisījuma un kvantificētu interesējošā RNS lielumu un daudzumu. Šī ir atšķirība starp nika tulkošanu un grunts pagarinājumu.
