Galvenā atšķirība - YAC vs M13 Phage Vector
DNS klonēšana ir svarīgs process, kas ļauj izplatīt svarīgus organismu DNS fragmentus. Tas prasa specifiskas DNS savienošanu ar vektoru DNS, lai izveidotu rekombinanto DNS, kas pārveidojas par saimniekorganismu. Vektors ir DNS molekula, kas izturas kā nesējs, lai svešu ģenētisko materiālu nogādātu citā šūnā vai organismā. Tam jāspēj replikēties saimniekorganisma iekšienē un radīt vairākas rekombinantās DNS kopijas. DNS klonēšanā tiek izmantoti dažādi vektoru veidi. Rauga mākslīgā hromosoma (YAC) un M13 fāga vektors starp tiem ir divi veidi. Galvenā atšķirība starp YAC un M13 fāgu vektoru ir tā, ka YAC ir mākslīga hromosoma, kas replikējas rauga šūnās, savukārt M13 fāga vektors ir bakteriofāga M13 viena virknes cirkulāra DNS, kas atkārtojas E Coli šūnās.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir YAC
3. Kas ir M13 fāga vektors
4. Blakus salīdzinājums - YAC vs M13 fāgu vektors
5. Kopsavilkums
Kas ir YAC Vector?
YAC ir mākslīgi veidota hromosoma, kas spēj pārvadāt lielu svešas DNS segmentu un atkārtoties rauga šūnās. Tam ir centromēra, telomēra un autonomi replikējošas sekvences, kas ir būtiskas replikācijai un stabilitātei. YAC vajadzētu būt arī ar selektīvu marķieri vai marķieriem un restrikcijas vietām, lai padarītu to par efektīvu klonēšanas vektoru. Lielas sekvences diapazonā no 1000 kb līdz 2000 kb var ievietot YAC un pārnest uz raugu.
01. attēls: YAC vektors
Kas ir M13 fāga vektors?
M13 bakteriofāgs ir vīruss, kas inficē un atkārtojas E Coli. M13 bakteriofāga genoms ir maza izmēra, apmēram 6,7 kb. Tā ir vienpavediena, apļveida un pozitīvas jutības DNS. Šis vīruss īpaši inficē E Coli baktērijas caur F pilus. Kad tas iekļūst baktērijā ssDNS, tas sintezē tā komplementāro virkni un kļūst par dsDNS vai M13 replikatīvo formu (RF). RF var rīkoties kā plazmīds saimniekorganismā. DsDNS replikējas E Coli iekšienē un ražo ssDNS ar jauniem fāgiem. Šie jaunie fāgi tiek nepārtraukti izdalīti no E Coli, nenogalinot saimniekšūnu. Tomēr infekcija palēnina E Coli augšanu. dsDNS var iegūt no baktēriju šūnām un izmantot kā vektorus DNS klonēšanā. Tie ir pazīstami kā M13 fāgu vektori. Ar tām var viegli manipulēt un izmantot līdzīgi kā plazmīdu vektorus.
Šo M13 fāžu raksturīgā infekcijas spēja kalpo kā laba kvalifikācija, lai to izmantotu kā vektoru gēnu klonēšanā. Attīstot M13 par vektoru, tā genomā jāiekļauj vairāki elementi. Tie ir lac repressora (lac I) proteīna gēns, lac Z gēna operatora tuvākais reģions, lac promoters un daudzkārtēja klonēšanas vieta (polylinker). Ja M13 dsDNS izmanto kā vektorus, to var apstrādāt kā plazmīdu vektoru. Tomēr ssDNS M13 izmantošanai ir priekšrocības DNS sekvencēšanā un uz vietas vērstajā mutagenēzē.
Tā kā M13 fāga vektoram ir vairākas klonēšanas vietas lacZ reģionā, rekombinētos vektorus var viegli identificēt, veicot zilās / baltās kolonijas skrīningu uz agara plāksnēm, kas satur IPTG un X-Gal. Zilās plāksnēs, kas izgatavotas uz plāksnēm, nav rekombinētu fāgu. Tāpēc klonēšanas nolūkā var izvēlēties fāgus ar ieliktņiem.
02. attēls: Bakteriofāgs M13
Kāda ir atšķirība starp YAC un M13 Phage Vector?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
YAC vs M13 fāga vektors |
|
| YAC ir ģenētiski modificēta hromosoma, kas spēj pārvadāt lielu svešas DNS segmentu un vairoties rauga šūnās. | M13 fāga vektors ir M13 bakteriofāga izstrādāts vīrusa vektors, ko izmanto svešas DNS ievietošanai E Coli. |
| Mērķis | |
| YAC tika izstrādāti, lai klonētu lielus genoma DNS fragmentus raugā. | M13 fāgu vektorus izmanto svešas DNS ievietošanai E Coli. |
| Ievietot garumu | |
| YAC var saturēt megabāzes lieluma genoma ieliktņus (1000 kb - 2000 kb). | Ieliktņu izmērs ir aptuveni 1500 bps. |
| Celtniecība | |
| YAC DNS ir grūti attīrīt neskartu, un, lai izveidotu YAC vektoru sistēmu, nepieciešama augsta koncentrācija. | Tas notiek caur ciklisku fotosintētisku elektronu ķēdi. |
| Stabilitāte | |
| YAC ir nestabils. | M13 fāgus var viegli iegūt. |
| Izmērs | |
| Fermenti ir lielākas molekulas. | M13 fāgi ir stabili nekā YAC. |
Kopsavilkums - YAC vs M13 Phage Vector
YAC ir mākslīgi izveidota vektoru sistēma, kurā tiek izmantots īpašs rauga hromosomas reģions, lai rauga šūnās ievietotu lielus ģenētiskā materiāla segmentus. M13 fāga vektors ir vektoru sistēma, kas iegūta no bakteriofāga M 13, kurā kā saimniekorganisms tiek izmantots E coli. Šī ir galvenā atšķirība starp YAC un M13 Phage Vector. Abi ir vienlīdz noderīgi rekombinantā DNS tehnoloģijā un gēnu klonēšanā.
