Galvenā atšķirība - cDNS pret genomisko bibliotēku
Ir divi galvenie DNS bibliotēku veidi, kurus zinātnieki izveidojuši, izmantojot gēnu inženierijas paņēmienus. Tās ir cDNA bibliotēka un genomikas bibliotēka. Galvenā atšķirība starp cDNS un genomisko bibliotēku ir tāda, ka cDNS bibliotēka satur visa organisma mRNS klonēto komplementāro DNS, savukārt genomiskās DNS bibliotēka satur visa organisma genoma klonētos fragmentus. Genomiskās DNS bibliotēka ir lielāka nekā cDNS bibliotēka.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir cDNS bibliotēka
3. Kas ir genomiskā bibliotēka
4. Blakus salīdzinājums - cDNS pret genomisko bibliotēku
5. Kopsavilkums
Kas ir genomiskā bibliotēka?
Genomu DNS bibliotēka ir klonu kolekcija, kas satur organisma kopējās genomiskās DNS fragmentus. Tas satur visu šī organisma genomisko DNS, ieskaitot kodējošās un nekodētās sekvences. Genomiskās bibliotēkas izveidi veic rekombinantā DNS tehnoloģija, kam seko klonēšana (gēnu inženierija). Konstrukcijā ir dažādi posmi, kā parādīts 01. attēlā. Process sākas ar genomiskās DNS izolāciju. Izmantojot piemērotu DNS ekstrakcijas protokolu, jāizolē visa organisma genomiskā DNS. Tad DNS jāpārvērš kontrolējamos izmēros vai īpašos fragmentos ar restrikcijas endonukleāzēm (DNS griešanas enzīmi). Sadrumstalota DNS jāievieto vektoros, izmantojot DNS ligāzes (DNS savienojošos enzīmus). Vektors ir sevi replikējošs organisms. Rekombinantās DNS tehnoloģijā parasti tiek izmantoti plazmīdi un bakteriofāgi. Šie sasaistītie vektori ir pazīstami kā rekombinantās DNS molekulas, jo tiem ir gan pašu, gan ievietotas DNS sekvences. Rekombinantos vektorus pievieno saimniekbaktērijai un izgatavo, lai uzņemtu rekombinantos vektorus baktērijas šūnā. Baktērijas ar rekombinantiem vektoriem (plazmīdām) jāaudzē barotnē. Baktēriju pavairošanas laikā baktēriju DNS kopā ar rekombinantajām plazmīdām atkārto to genomus un ražo klonus. Šie kloni satur visu avota organisma genomu. Tādējādi to sauc par genomu bibliotēku. Plazmīdus var viegli atdalīt no baktēriju hromosomu DNS, lai izveidotu šī organisma genomisko bibliotēku. Ja kādā konkrētā organismā ir ieinteresēti gēni,to ir viegli noteikt genomiskajā bibliotēkā, veicot hibridizāciju, izmantojot molekulārās zondes (marķierus).
Genomu bibliotēkas ir svarīgas, lai pētītu genoma struktūru un funkcijas, specifiskos gēnus, gēnu atrašanās vietu, gēnu kartēšanu, mutācijas, gēnu sekvencēšanu, jaunu terapeitisko gēnu identifikāciju utt.
Attēls_1: genomiskās bibliotēkas būvniecība
Kas ir cDNS bibliotēka?
CDNS bibliotēka ir komplementāru DNS (cDNS) klonu kolekcija, kas sintezēti no organisma kopējās mRNS. Būvniecības procedūra ietver dažādus posmus. Pirmais solis ir kopējās mRNS attīrīšana no organisma. Izolēto mRNS pārvērš cDNS virknēs ar procesu, ko sauc par reverso transkripciju. Reverso transkripciju veicina ferments, ko sauc par reverso transkriptāzi. Tas izmanto nelielu 3 'primeru un sāk pirmās cDNS virknes sintēzi, kas ir komplementāra matricas mRNS virknei. Rezultātā izveidojusies divsavienojuma cDNS tiek pārveidota mazākos fragmentos, izmantojot restrikcijas endonukleāzes, un ievietota piemērotos vektoros. Šīs konstruētās rekombinantās molekulas pēc tam pievieno saimniekorganismā un audzē barotnē, lai iegūtu klonus. Klonu kolekcija, kas satur organisma cDNS fragmentus, ir pazīstama kā cDNS bibliotēka. Pilnībā sagriezta nobriedusi mRNS nesatur intronus un regulēšanas reģionus. Tāpēc atšķirībā no genomiskās bibliotēkas cDNS bibliotēkās nav kodējamo fragmentu.
kDNS bibliotēkas ir svarīgas, lai analizētu kodēšanas reģionus, gēnu funkcijas, gēnu ekspresiju utt.
_2 attēls: cDNS bibliotēkas izveidošana
Kāda ir atšķirība starp cDNS un Genomic Library?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
cDNA pret genomisko bibliotēku |
|
| cDNS bibliotēka ir klonu kolekcija, kas satur komplementāru DNS organisma mRNS | Genomiskā bibliotēka ir klonu kolekcija, kas satur organisma kopējo genomisko DNS. |
| Kodēšana vs nekodēšanas secības | |
| cDNS bibliotēkā ir tikai kodējošās sekvences; tas nesatur intronus. | Genomiskā bibliotēka sastāv no visas genomiskās DNS, ieskaitot nekodējošu (intronu un regulējošo) DNS. |
| Izmērs | |
| cDNA bibliotēka ir maza. | Genomikas bibliotēka ir liela. |
| Sākuma materiāls | |
| Sākuma materiāls ir mRNS | Sākuma materiāls ir DNS. |
| Reversās transkripcijas iesaistīšana. | |
| Reversā transkripcija notiek pirmās cDNS virknes sintēzē. | Reversā transkripcija nenotiek. |
Kopsavilkums - cDNS un genomiskā bibliotēka
Genomiskā bibliotēka pārstāv klonu populāciju, kas satur fragmentētu kopējo organisma genomisko DNS. cDNS bibliotēka atspoguļo to klonu populāciju, kuri satur komplementāru DNS no visas organisma mRNS. CDNS klons satur tikai secības, kas atrodamas mRNS, savukārt genoma klons satur visa genoma sekvences. Šī ir atšķirība starp cDNS un genomu bibliotēku.
