Galvenā atšķirība - nitroceluloze pret neilona membrānu
Blotēšana ir svarīga metode, lai noteiktu molekulāru bioloģijā noteiktas DNS, RNS un olbaltumvielu secības no to maisījumiem. To veic, izmantojot membrānu, ko sauc par blot. Ir dažādas blotēšanas metodes, piemēram, ziemeļu, dienvidu un rietumu blotēšana. Lai novērstu nespecifisku saistīšanos un nepareizu atklāšanu, blotēšanas procesam jāizvēlas pareiza membrāna. Blotēšanas metodēs parasti tiek izmantotas nitroceluloze, neilons un PVDF. Viņiem ir dažādas īpašības. Galvenā atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu ir tā, ka nitrocelulozes membrānām ir augsts proteīna imobilizācijas potenciāls, savukārt neilona membrānām ir augsts nukleīnskābes imobilizācijas potenciāls. Tomēr abus membrānu tipus bieži izmanto blotēšanas metodēs.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir nitrocelulozes membrāna
3. Kas ir neilona membrāna
4. Blakus salīdzinājums - nitroceluloze pret neilona membrānu
5. Kopsavilkums
Kas ir nitrocelulozes membrāna?
Nitrocelulozes membrāna ir parasti izmantots membrānas filtrs nukleīnskābes un olbaltumvielu blotēšanas metodēs. Tam ir liels olbaltumvielu saistīšanās potenciāls. Tādējādi nitrocelulozes membrānas plaši izmanto rietumu blotēšanas tehnikā. Nitrocelulozes membrānas ir saderīgas ar visām hibridizācijas metodēm, un tām ir lielākas saistīšanās spējas bez traucējumiem. Nitrocelulozes membrānām ir dabiski hidrofils raksturs. Tie veido hidrofilu mijiedarbību ar molekulām un efektīvi imobilizē tās uz membrānas. Komerciālās nitrocelulozes membrānas ir pieejamas divos poru izmēros: 0,45 un 0,2 µm.
01. attēls: Nitrocelulozes membrāna, ko izmanto rietumu blotēšanā
Kas ir neilona membrāna?
Neilona membrāna ir cita veida komerciāla membrāna, ko izmanto blotēšanas metodēs. To alternatīvi lieto ar nitrocelulozes membrānām dienvidu un ziemeļu blotēšanai. Neilona membrānas ir ideāli piemērotas dienvidu blotēšanai nekā nitroceluloze, jo tām ir augsta afinitāte pret saistīšanos ar DNS. Sakarā ar vairākām neilona membrānu unikālajām īpašībām, pētnieki parasti izmanto neilona membrānas dienvidu un ziemeļu blotēšanai, nevis virs nitrocelulozes membrānas. Neilona membrānas ir ieteicamas arī atdalīšanai un atjaunošanai, atšķirībā no nitrocelulozes.
02. attēls: neilona membrāna, ko izmanto dienvidu blotēšanai
Kāda ir atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Nitroceluloze pret neilona membrānu |
|
| Nitrocelulozes membrānas ir trauslas. | Neilona membrānas ir mazāk trauslas. |
| Pārkraušana | |
| Ar viņiem ir grūti rīkoties. | Ar tiem ir viegli rīkoties. |
| Reprobēšana | |
| Neatbalstītas nitrocelulozes membrānas ir grūti pārģērbt. | Izmantojot neilona membrānas, ir viegli atjaunot. |
| Saderība ar dažādiem uzglabāšanas apstākļiem | |
| Nitrocelulozes membrānām ir mazāka izturība, lai izturētu dažādus uzglabāšanas apstākļus. | Neilona membrānas izturīgāk reaģē uz dažādiem uzglabāšanas apstākļiem. |
| Izmantot | |
| Nepieciešama iepriekšēja nodošana. | Neilona membrānām nav nepieciešams veikt iepriekšēju sagatavošanu. |
| Hidrofilā daba | |
| Nitrocelulozes membrānām ir hidrofils raksturs, bet tās ir mazāk hidrofilas nekā neilona membrānām. | Viņiem ir ļoti hidrofils raksturs. |
| Imobilizācijas potenciāls | |
| Nitrocelulozes membrānām ir mazāka afinitāte pret nukleīnskābēm. Bet tam ir augsta afinitāte pret olbaltumvielām. | Neilona membrānām ir augsts saistīšanās potenciāls ar nukleīnskābēm nekā nitrocelulozes membrānām. |
Kopsavilkums - Nitroceluloze pret neilona membrānu
Nitroceluloze un neilona membrānas ir īpašas loksnes, ko izmanto blotēšanas tehnikā, lai atveidotu joslu rakstu uz gela. Tie dod iespēju noteikt noteiktu secību vai olbaltumvielu no maisījumiem, imobilizējot tos uz membrānas. Kad molekulas ir imobilizētas uz membrānas, to var izmantot kā substrātu hibridizācijas analīzei ar marķētām zondēm. Nitrocelulozes membrānu parasti izmanto olbaltumvielu noteikšanai rietumu blotēšanas tehnikā, jo tai ir augsta saistīšanās afinitāte ar olbaltumvielām. Dienvidu un ziemeļu blotēšanai bieži izmanto neilona membrānas. Šī ir atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu.
