Galvenā atšķirība - silta vs auksta tripsinizācija
Silta un auksta tripsinizācija ir divas metodes, ko izmanto šūnu fermentatīvai sadalīšanai dzīvnieku šūnu kultivēšanā. Galvenā atšķirība starp silto un auksto tripsinizāciju, kā norāda nosaukumi, ir atkarīga no temperatūras, kurā tripsīnu pievieno šūnu sadalīšanai. Silta tripsinizācija notiek augstākas temperatūras apstākļos (36,5 - 37 0 C), turpretī aukstā tripsinizācija notiek zemas temperatūras apstākļos.
Dzīvnieku šūnu primārās šūnu kultivēšanas procesā tiek izmantotas trīs galvenās metodes, kas ir izrādījušās veiksmīgas. Trīs metodes ietver šūnu mehānisku sadalīšanu, šūnu fermentatīvo sadalīšanu un primāro eksplantēšanas paņēmienu. Šūnu fermentatīvā sadalīšana, kas izraisa šūnu izolāciju, un to veic olbaltumvielu noārdošais enzīms tripsīns. Tādēļ šis process ir pazīstams kā tripsinizācija. Tripsinizāciju var veikt divos dažādos apstākļos, proti, siltajā tripsinizācijā un aukstajā tripsinizācijā. Silta tripsinizācija ir šūnu apstrādes metode ar tripsīnu siltos apstākļos 36,5 - 37 0 temperatūrā. C. Aukstā tripsinizācija ir tripsīna apstrādes process, kas notiek vēsākos apstākļos, vēlams ledū, uzturot ļoti zemu temperatūru.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir silta tripsinizācija
3. Kas ir aukstā tripsinizācija
4. Līdzības starp silto un auksto tripsinizāciju
5. Blakus salīdzinājums - silts un auksts tripsinizācija tabulas veidā
6. Kopsavilkums
Kas ir silta tripsinizācija?
Tripsinizāciju var veikt, lai sadalītu šūnu komponentus, lai izolētu šūnas, lai iegūtu primāro šūnu kultūru. Tripsīns ir olbaltumvielu noārdīšanās ferments, un tripsīnu veidošanā izmantotais enzīmu maisījums var būt vai nu neapstrādāts ekstrakts, vai arī attīrīts produkts. Tiek uzskatīts, ka neapstrādātais ekstrakts ir efektīvāks olbaltumvielu lizā un šūnu sadalīšanās procesā, jo tas satur citus noārdošos enzīmus.
Silta tripsinizācija ir visbiežāk izmantotā fermentatīvā metode šūnu sadalīšanai, kas notiek augstākas temperatūras apstākļos. Pirms apstrādes ar tripsinizāciju vēlamos audus sasmalcina mazākos gabaliņos. Tas atvieglo vienkāršu sadalīšanas procesu. Sasmalcinātos audus pēc tam mazgā īpašā barotnē, kas pazīstama kā Dissection Basal Salt barotne.
Pēc mazgāšanas posma pabeigšanas šūnas tiek pārveidotas kolbā, kas satur aktīvo fermentu, kas ir tripsīns. Tā kā šī metode prasa siltu tripsinizācijas protokolu, tripsīnu apmēram četras stundas ievieto aptuveni 37 0 C temperatūrā.
01. attēls: tripsīns
Saturs tiek sajaukts un maisīts, izmantojot centrifugēšanas metodes protokola ērtībai un sadalīšanas procesa paātrināšanai. Kad sasniegts ieteicamais laiks, šūnas var iegūt no supernatanta. Šūnas, kas iegūtas no supernatanta, pēc tam inkubē noteiktā temperatūrā un laikā.
Kas ir aukstā tripsinizācija?
Aukstā tripsinizācija ir otrs tripsinizācijas veids, kas notiek aukstos apstākļos. Šajā metodē sasmalcinātās un mazgātās šūnas ievieto flakonos uz ledus un pēc tam iemērc ar tripsīnu. Mērcēšanas periods ir daudz ilgāks - apmēram 6 - 24 stundas.
Pēc mērcēšanas procedūras pabeigšanas tripsīnu izņem no šūnu lizāta, un audu gabalus turpina inkubēt 37 ° C temperatūrā apmēram 20 - 30 minūtes. Šūnu sadalīšana tiek veikta, atkārtoti pipetējot audu maisījumu. Tas ļaus šūnām atdalīties no membrānas un nonākt virsējā slānī. Kad šūnas atrodas supernatantā, tās inkubē un audzē vēlamajā temperatūrā un laika periodā.
Aukstā tripsinizācijas metodei ir vairākas priekšrocības
- Lielāka dzīvotspējīgu šūnu raža, jo šūnu bojājumi tiek samazināti līdz minimumam. Šūnu bojājumus samazina līdz minimumam, neizmantojot centrifugēšanas darbības.
- Ļoti ērta metode.
- Mazāk darbietilpīgs.
Aukstās tripsinizācijas metodes galvenais ierobežojums ir tāds, ka lielus daudzumus nevar izmantot vienā gadījumā.
Kādas ir siltās un aukstās tripsinizācijas līdzības?
- Gan siltajos, gan aukstajos tripsinizācijas procesos šūnu sadalīšanai izmanto fermentu tripsīnu.
- Šūnu sadalīšanas procedūrās šūnu kultūras procedūrās tiek izmantoti gan siltie, gan aukstie tripsinizācijas procesi.
- Gan siltās, gan aukstās tripsinizācijas ārstēšanas procedūrās šūnas tiek iegūtas no supernatanta.
Kāda ir atšķirība starp siltu un aukstu tripsinizāciju?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Silta vs auksta tripsinizācija |
|
| Silta tripsinizācija ir šūnu apstrādes metode ar tripsīnu siltos apstākļos 36,5 - 37 0 temperatūrā. | Aukstā tripsinizācija ir tripsīna apstrādes process, kas notiek vēsākos apstākļos, vēlams ledū, uzturot ļoti zemu temperatūru. |
| Protokols | |
| Sasmalcinātie audu gabali tiek nepārtraukti uzturēti 37 ° C temperatūrā visas procedūras laikā. | Sasmalcinātos audu gabalus sākotnēji uztur ledus aukstā temperatūrā un pēc tam uztur 37 0. |
| Temperatūra | |
| Siltā tripsinizācija notiek pie 36,5 - 37 0 | Aukstā tripsinizācija notiek ledus aukstā temperatūrā. |
| Patērētais laiks | |
| Visam siltā tripsinizācijas procesam (apmēram 4 stundas) vajadzīgs mazāks laiks. | Aukstai tripsīnizācijai nepieciešams ilgāks laiks (apmēram 6 - 24 stundas). |
| Dzīvotspējīgo šūnu raža | |
| Zems siltā tripsinizācijas līmenis. | Augsts aukstā tripsinizācijas līmenis. |
| Centrifugēšanas izmantošana | |
| Centrifugēšana ir nepieciešama šūnu sadalīšanai siltā tripsinizācijā. | Centrifugēšana nav nepieciešama aukstā tripsinizācijā. |
| Sākotnējais audu daudzums tripsinizācijai | |
| Siltajā tripsinizācijā var izmantot lielāku daudzumu audu. | Aukstā tripsinizācijā var izmantot mazāku audu daudzumu. |
| Šūnu bojājumi | |
| Augsts, pateicoties centrifugēšanai siltā tripsinizācijā. | Mazāk aukstās tripsinizācijas dēļ. |
Kopsavilkums - silta vs auksta tripsinizācija
Tripsinizācija ir olbaltumvielu noārdošā fermenta tripsīna izmantošanas metode primāro šūnu kultūru sadalīšanai un sagatavošanai šūnu kultivēšanas procesā. Ir divi galvenie tripsinizācijas paņēmieni, pamatojoties uz procedūras laikā izmantoto temperatūru. Tie ir silti un auksti tripsinizācija. Silto tripsinizāciju veic 37 ° C temperatūrā, savukārt auksto tripsinizāciju - ledus aukstos apstākļos. Kaut arī aukstās tripsinizācijas pabeigšanai nepieciešams ilgāks laiks, tiek teikts, ka tai ir lielāka dzīvotspējīgu šūnu raža. Tas ir saistīts ar faktu, ka aukstā tripsinizācijā šūnu bojājumi tiek samazināti līdz minimumam, jo tajā netiek izmantotas intensīvas centrifugēšanas darbības. Šī ir atšķirība starp siltu un aukstu tripsinizāciju.
