Galvenā atšķirība - Benzonase vs DNase
Nukleīnskābju noārdīšanās ir svarīga daudzām molekulārās bioloģijas metodēm. To plaši izmanto rekombinantās DNS tehnoloģijās, lai atbrīvotos no nevēlamiem DNS un RNS fragmentiem. Nukleīnskābi noārdošie enzīmi tiek saukti par nukleāzēm, un tie var būt dažāda veida, pamatojoties uz nepieciešamo funkciju. Nukleāzes, kas noārda DNS, ir pazīstamas kā DNāzes, bet tās, kas noārda RNS, ir zināmas RNāzes. Šos enzīmus galvenokārt izmanto in vitro eksperimentos, kur tiek veikti in vitro molekulārie testi, lai izolētu tīru DNS, RNS vai olbaltumvielas. Benzonāzes ir nukleāžu veids, kas noārda gan DNS, gan RNS, bet DNāzes - tikai DNS. Šī ir galvenā atšķirība starp benzonāzi un DNase.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir benzonāze
3. Kas ir DNase
4. Benzonāzes un DNāzes līdzības
5. Blakus salīdzinājums - Benzonāze pret DNāzi tabulas veidā
6. Kopsavilkums
Kas ir benzonāze?
Benzonāze ir Serratia marcescens ģenētiski modificēta endonukleāze. Šis ferments tiek ražots E. coli saimniekos rūpnieciskā mērogā. Benzonāze spēj sašķelt divkāršu DNS, lineāru DNS, apļveida DNS un vienpavedienu RNS. Tādējādi benzonāze ir komerciāli svarīga. Benzonāzes ferments ir olbaltumvielu dimērs, kurā ir 245 identiskas aminoskābes, ~ 30 kDa apakšvienības ar divām būtiskām disulfīdu saitēm. Benzonāze sašķeļ nukleīnskābes tās 5 'galā un rada fragmentus ar brīviem 5'galiem. Benzonāze var sašķelt nukleīnskābes jebkurā secībā, bet dod priekšroku ar GC bagātiem reģioniem.
Benzonāze tiek uzglabāta -20 ° C temperatūrā. Optimālais fermentu aktivitātes pH ir 8,0–9,2. Benzonāzes pielietojums ietver parauga sagatavošanu proteīna 2D gēla elektroforēzei, kur benzonāze noņem saistītās nukleīnskābes un nukleīnskābes piesārņotāju noņemšanu no rekombinanto olbaltumvielu preparātiem. To lieto arī, lai samazinātu olbaltumvielu ekstraktu viskozitāti un novērstu šūnu salipšanu šūnu maisījumā.
Kas ir DNase?
DNāze ir nukleāze, hidrolītisks enzīms, kas spēj sašķelt tikai divkāršu DNS. Ir divi galvenie DNāzes veidi: DNase I un DNase II. DNase I piedalās divšķiedru DNS šķelšanā, lai iegūtu polinukleotīdus ar 5 'brīvajiem galiem. DNase II ir iesaistīta divšķiedru DNS šķelšanā, lai iegūtu polinukleotīdu virknes ar 3 'brīviem galiem vai pārkarēm.
DNase I
DNase I darbojas pie optimālā pH no 7,0 līdz 8,0. Fermenta aktivitāte ir atkarīga no daudziem jonu kofaktoriem, tostarp Ca 2+, Mg 2+ vai Mn 2+. Mg 2+ un Mn 2+ aktivitāte nosaka DNase I funkciju. Mg 2+ klātbūtnē DNase I katru dsDNS virkni šķeļ neatkarīgi. Tas notiek nejauši. Turpretī Mn 2+ klātbūtnē ferments sašķeļ abas DNS virknes aptuveni vienā un tajā pašā vietā. Šī šķelšanās rezultātā tiks iegūti divu veidu DNS fragmenti; viena veida ar neasiem galiem un cita veida ar vienu vai divām nukleotīdu pārkarēm.
02. attēls: DNase
DNase II
DNase II darbojas pie optimālā pH 4,5-5,0 un tā aktivitātei ir nepieciešami divvērtīgi metāla joni, līdzīgi kā DNase I. Ir zināms, ka DNase II mehānisms sastāv no trim galvenajiem posmiem.
- DNS mugurkaulā tiek izraisīti vairāki vienas virknes pārtraukumi.
- Tiek ražoti skābē šķīstoši nukleotīdi un oligonukleotīdi.
- Nelineāra hiperhromiska nobīde notiek pēdējā fāzē.
Galvenie DNāzes enzīma inhibitori ietver metāla helātus, pārejas metālus un ķīmiskas vielas, piemēram, nātrija dodecilsulfātu un β - merkaptoetanolu.
Galvenie DNāzes pielietojumi ir bez DNS saturošu RNS ekstraktu un olbaltumvielu ekstraktu sagatavošana un DNS matricas noņemšana transkripcijas eksperimentu laikā in vitro.
Kādas ir benzonāzes un DNāzes līdzības?
- Abi ir hidrolītiski fermenti.
- Abas ir nukleāzes.
- Abi piedalās, atdalot nukleīnskābju fosfodiesteru saites.
- Lai saglabātu fermenta aktivitāti, abiem nepieciešama optimāla pH un uzglabāšanas temperatūra.
- Fermentu inhibitori ietver helātus veidojošus līdzekļus, pārejas metālus un mazgāšanas ķimikālijas.
- Lietojumi galvenokārt ir vērsti uz augstas tīrības pakāpes DNS, RNS un olbaltumvielu ekstraktu iegūšanu.
- Abus fermentus var ražot, izmantojot gēnu inženieriju.
Kāda ir atšķirība starp benzonāzi un DNase?
Atšķirīgs raksts vidū pirms tabulas
Benzonāze vs DNase |
|
| Benzonāze ir ferments, kas spēj sašķelt DNS, lineāro DNS, apļveida DNS un RNS. | DNāze ir ferments, kas spēj sašķelt divējādu DNS. |
| Fermenta substrāts | |
| Gan DNS, gan RNS ir benzonāzes substrāti. | DNS ir DNāzes substrāts. |
| Struktūra | |
| Benzonāzes optimālais pH diapazons ir 7,0–8,0 | Optimālie DNāzes I pH diapazoni ir 7,0–8,0 un DNāzes II ir 4,5–5,0. |
Kopsavilkums - Benzonase vs DNase
Nukleāzes fermentus plaši izmanto dažādās eksperimentālajās procedūrās attiecībā uz molekulāro bioloģiju un gēnu inženieriju. Benzonāze un DNāze ir divu veidu nukleāzes. Benzonāze ir iesaistīta gan DNS, gan RNS noārdīšanā, savukārt DNase ir iesaistīta divšķiedru DNS šķelšanā. Šī ir pamata atšķirība starp benzonāzi un DNāzi. Pašlaik abi šie nukleāzes veidi tiek ražoti, izmantojot rekombinanto DNS tehnoloģiju, kas dod augstākas kvalitātes enzīmus, kas ir optimizēti maksimālai ražošanai.
Lejupielādēt Benzonase vs DNase PDF versiju
Jūs varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistes vajadzībām, kā norādīts piezīmē. Lūdzu, lejupielādējiet PDF versiju šeit Starpība starp benzonāzi un DNase
